收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

人羊膜间充质干细胞分离培养鉴定及抑制异基因淋巴细胞增殖的实验研究

孙鸿丽  
【摘要】: 研究目的: 1、体外分离培养、纯化并鉴定人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)。 2、研究hAMSCs对异基因混合淋巴细胞反应(MLR)体系中淋巴细胞增殖及相关细胞因子的影响。 研究方法: 1、采用酶消化法从羊膜分离出hAMSCs,进行传代培养、逐步纯化,流式细胞仪检测细胞表面标志,并通过条件培养基定向诱导,最后根据形态学、生物学特征、细胞表面标志以及分化潜能鉴定hAMSCs纯度。 2、建立双向MLR体系,加入丝裂霉素处理过的不同比例的hAMSCs,用3H掺入法测定淋巴细胞增殖率并用ELISA法测定混合培养上清液中白细胞介素-2(IL-2)和干扰素-γ(IFN-γ)的含量,观察hAMSCs对淋巴细胞增殖和相关细胞因子的影响。 研究结果: 1、从羊膜中分离的细胞接种24小时后便有少量的细胞贴壁,经1周后逐渐形成扁平单层细胞,呈漩涡状生长或成簇生长,随着细胞密度的增加,胞体变得细长,形态类似成纤维细胞。培养的细胞可以稳定生长传代,而且体外培养10代以后,细胞的增殖速度无明显减慢。 2、hAMSCs的原代细胞在接种后2~8天后进入对数生长期,相差显微镜下观察细胞突起向周围伸展,出现两个核细胞分裂相的hAMSCs多见,细胞密度增大,彼此相连;11~14天进入平台期,hAMSCs铺满瓶底,细胞扩增趋缓,原代培养结束。hAMSCs传代后P3代和P15代的生长曲线显示,随着hAMSCs的逐渐纯化,细胞倍增速度基本稳定。传代后6~12小时,相差显微镜下即可观察到细胞贴壁;2~4天后进入到对数生长期,扩增速度明显快于原代培养;6~7天即可铺满培养板底。 3、hAMSCs表达有BMSCs相似的表面标志,流式细胞仪检测显示,hAMSCs表达CD29、CD44和CD105,不表达CD34、CD45、HLA-DR和CD106。 4、hAMSCs向神经细胞诱导24h后,细胞形态明显改变,胞体回缩,胞核部分折光性增强,出现类似于树突及轴突样结构,染色可见兔抗人神经元特异性烯醇化酶(NSE)和兔抗人胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性。hAMSCs向成骨细胞诱导分化2周后,细胞形态由纺锤形转变为多角形,染色可见I型胶原阳性;3~4周后可见钙结节形成。 5、用3H-TdR掺入法对淋巴细胞增殖进行检测。hAMSCs以不同的hAMSCs /外周血单个核细胞(PBMC)比例加入MLR体系共同培养后,各组cpm值均较培养前明显下降(P均0.05);hAMSCs /PBMC比例为1?5和1?10的两组,其增殖抑制率均明显强于1?500组(P均0.05)。 6、hAMSCs与未经活化的淋巴细胞混合培养( PBMC1+hAMSCs组、PBMC2+hAMSCs组)时,培养上清中的IL-2、IFN-γ水平与单独淋巴细胞培养(PBMC1组或PBMC2组)上清中的水平无明显变化(P均0.05);hAMSCs加入MLR体系(PBMC1+ PBMC2+hAMSCs组)中培养时,细胞因子IL-2和IFN-γ的分泌均明显低于单纯MLR体系(PBMC1+PBMC2组)中的量(P0.05)。 研究结论: 1、体外可以分离培养hAMSCs,hAMSCs具有与BMSCs相似的细胞生物学特性以及多向分化潜能。 2、hAMSCs可以抑制MLR体系中淋巴细胞的增殖,呈剂量依赖性;并可下调MLR体系中IL-2和IFN-γ水平,对同种异体免疫反应具有负调节作用,为日后临床联合应用MSCs和造血干细胞移植以预防和治疗移植物抗宿主病(GVHD)提供理论基础。 3、hAMSCs可以作为间充质干细胞(MSCs)基础及临床应用研究的全新来源。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 梁波;史明霞;李维佳;董坚;;人羊膜间充质干细胞分离培养及鉴定[J];中国公共卫生;2010年11期
2 常克亮;关方霞;杨波;杜英;李祥生;宋来君;胡祥;;不同保存时间人羊膜来源的间充质干细胞增殖能力比较[J];中国组织工程研究与临床康复;2008年25期
3 钱永海;李维佳;史明霞;董坚;梁波;魏彩霞;;羊膜间充质干细胞对异体外周血淋巴细胞转化的影响[J];肿瘤学杂志;2010年07期
4 高松哲;陈剑;王彦平;肖盼;宋子宣;阮余霞;杨筱曦;吴静;唐光霞;;碱性成纤维细胞生长因子对体外培养人羊膜间充质干细胞增殖的影响[J];热带医学杂志;2011年05期
5 章守琴;李维佳;史明霞;钱永海;;人羊膜间充质干细胞支持造血的体外实验[J];中国组织工程研究与临床康复;2010年49期
6 王兆福;焦红亮;李建斌;单泓;郑文迪;谷晨熙;杜英;关方霞;杨波;;不同来源人羊膜间充质干细胞的混合培养[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年06期
7 金钧;黄坚;王俊;付建红;;体外羊膜间充质干细胞分离培养及向神经元样细胞的分化[J];中国组织工程研究与临床康复;2010年32期
8 陈霞;尹晓娟;;不同传代倍数人羊膜来源的间充质干细胞成骨成脂分化平衡的研究[J];西南国防医药;2011年07期
9 章守琴;李维佳;史明霞;;胎膜干细胞的分离方法和特性[J];医学综述;2010年03期
10 李炎唐;腔内切开并用羊膜治疗长段尿道完全阻塞和狭窄[J];解放军医学杂志;1987年06期
11 唐永柱;用人羊膜治疗慢性四肢溃疡[J];云南医药;1996年04期
12 ;血小板和羊膜间相互作用的体外研究: 足月前胎膜早破可能的治疗[J];实用妇产科杂志;1998年05期
13 沈忠英,陈铭华,李乔山,沈健;羊膜上皮程序性细胞死亡的超微结构研究[J];电子显微学报;2000年03期
14 杨丽霞,郝军生;羊膜联合自体角膜缘移植治疗复发性翼状胬肉[J];山东大学基础医学院学报;2002年06期
15 刘映新;B超诊断羊膜片形成1例[J];中国超声诊断杂志;2003年06期
16 张慧哲;羊膜血管与脐带伴行一例[J];中国优生与遗传杂志;2004年S1期
17 徐国英;;羊膜移植治疗翼状胬肉[J];职业与健康;2006年19期
18 叶萍;钱孝纲;;羊膜束带综合征超声表现一例[J];中华医学超声杂志(电子版);2007年04期
19 孙秉基,贺燚,种平,赵东卿,李家臣,祝磊,王印其;保存人羊膜联合自体角膜缘移植治疗严重眼表疾病[J];河南医学研究;2000年04期
20 屈波,李才柱;重症眼部碱烧伤的早期羊膜移植[J];中国实用眼科杂志;2001年10期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王巧稚;韩艺;赵宏贤;余鸿;刘广益;;当归诱导人脂肪间充质干细胞向神经细胞分化和毒性检测的研究[A];中国解剖学会第十一届全国组织学与胚胎学青年学术研讨会论文汇编[C];2009年
2 王玉红;陈光辉;;地黄低聚糖对人脂肪组织源性间充质干细胞分泌肝细胞生长因子的影响[A];2010全国中西医结合危重病、急救医学学术会议论文汇编[C];2010年
3 杜凤移;王皓;杨树龙;赵绘存;杨英;杨军;;纳米纤维支架对大鼠间充质干细胞向肝细胞分化的影响[A];天津市生物医学工程学会第29届学术年会暨首届生物医学工程前沿科学研讨会论文集[C];2009年
4 郭勇;张西正;郭春;魏严;李瑞欣;徐晓莹;张永红;;脂肪间充质干细胞向心肌细胞分化中心肌发育相关基因的表达[A];天津市生物医学工程学会2008年年会暨首届生物医学工程与临床论坛论文集[C];2008年
5 朱恒;江小霞;刘元林;张毅;毛宁;;间充质干细胞选择性调节破骨细胞发育和功能[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年
6 张颢;陶艳玲;邱林;张伯龙;马军;陈志哲;刘拥军;韩忠朝;;一种具有免疫负调节功能的人脐带源间充质干细胞[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
7 杨少光;池颖;戎丽娟;邢文;卢士红;赵钦军;马凤霞;韩忠朝;;不同来源间充质干细胞诱导分化成血管内皮细胞的比较[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年
8 李杰平;孔佩艳;李佳丽;朱丽丹;孔祥敬;曾东风;刘红;王庆余;彭贤贵;陈幸华;张曦;;纯化的自体CD34+细胞联合间充质干细胞治疗难治性克隆恩病一例并文献复习[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年
9 罗高兴;程文广;黄正根;贺伟峰;袁顺宗;陈希炜;吴军;;应用人脐带血间充质干细胞修复小鼠皮肤缺损创面的实验研究[A];第六届全国烧伤救治专题研讨会论文汇编[C];2009年
10 郭振兴;郑翠玲;陈振萍;董文川;杨仁池;;胚胎骨髓来源的间充质干细胞对人Th17细胞免疫调节作用的研究[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 彭飞;620nm非相干红光对大鼠骨髓间充质干细胞的光生物调节作用[D];华中科技大学;2011年
2 于美娇;系统归巢的间充质干细胞在牙周组织修复再生过程中的作用研究[D];山东大学;2011年
3 李东杰;人脐带间充质干细胞促进创面愈合及体外诱导分化为表皮样细胞的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
4 李宝军;脂肪间充质干细胞体外诱导及复合PLGA体内异位成软骨的实验研究[D];中南大学;2007年
5 朱雅姝;Flk-1~+间充质干细胞对肿瘤细胞增殖的抑制作用及其分子机制研究[D];中国协和医科大学;2008年
6 吴桂珠;脂肪间充质干细胞治疗压力性尿失禁的实验研究[D];福建医科大学;2010年
7 熊卉;转化生长因子β1基因体外转染兔颞下颌关节滑膜间充质干细胞向纤维软骨转化实验研究[D];武汉大学;2010年
8 苗宗宁;胎盘间充质干细胞与丝素蛋白/羟基磷灰石材料在骨创伤修复中的实验研究[D];苏州大学;2010年
9 梁伟;人骨髓Flk-1~+间充质干细胞抗DNA损伤物质影响作用研究[D];中国协和医科大学;2008年
10 曾光伟;磁标记羊膜间充质干细胞移植对大鼠海马齿状回组织再生的实验研究[D];郑州大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 章守琴;人羊膜间充质干细胞支持造血的体外研究[D];昆明医学院;2010年
2 陈芳;脐带间充质干细胞修复化疗所致卵巢颗粒细胞损伤的体外实验[D];暨南大学;2010年
3 张茜真;人脐带间充质干细胞的分离、鉴定以及干细胞特异性转录因子诱导其重编程的研究[D];浙江理工大学;2010年
4 陈义;脐带间充质干细胞培养及体外重建角膜后板层的初步研究[D];暨南大学;2010年
5 唐子滨;纳米级胶原基骨材料复合自体脂肪间充质干细胞用于兔后外侧脊柱融合的实验研究[D];河北医科大学;2010年
6 齐凯;人脐带来源间充质干细胞分离培养方法的优化初探[D];山西医科大学;2011年
7 马兰兰;不同胎龄人脐带血间充质干细胞的研究[D];中国医科大学;2010年
8 李成华;口腔黏膜间充质干细胞存在及在口腔扁平苔藓中变化的初步研究[D];第四军医大学;2010年
9 田毅;人脐带Wharton's jelly间充质干细胞的生物学特性以及其与脑肿瘤干细胞共培养的实验研究[D];郑州大学;2010年
10 张福丽;间充质干细胞治疗肺动脉高压研究进展(附肺动脉高压发病机制进展)[D];山西医科大学;2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 王秋月 王琳;空军总医院采用间充质干细胞救治小脑萎缩[N];科技日报;2009年
2 记者 李素锋;我市首例间充质干细胞移植手术取得成功[N];临汾日报;2009年
3 李玉花 孙扬;羊膜片移植治眼化学伤[N];健康报;2003年
4 文彬;辐照生物羊膜等产品有了分类界定[N];中国医药报;2003年
5 印高乐;台湾医生发现羊膜具有抑制血管增生功能[N];中国高新技术产业导报;2002年
6 印高乐;羊膜可抑制血管增生[N];医药经济报;2002年
7 记者 王丹 通讯员 艾素;异染性脑白质营养不良治疗获突破[N];健康报;2010年
8 李惠义 吴进;胎儿附属物 功能可不小[N];大众卫生报;2002年
9 记者 白毅;间充质干细胞可促进成熟树突状细胞增殖分化[N];中国医药报;2009年
10 北京大学第一医院;为眼表面化学烧伤患者带来光明[N];中国医药报;2003年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978