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抗生素对新生大鼠肠道菌群及肠道免疫发育影响的研究

王爱丽  
【摘要】: 目的通过建立动物模型,研究口服抗生素对新生大鼠肠道菌群的变化及肠道免疫发育的影响。 方法选用50只7日龄新生SD大鼠,雌雄不限,随机分为5组,即对照组(A)、抗生素组(B)、益生菌组(C)、益生菌干预组(D)和生理盐水组(E),每组10只,后4组为模型组。B组:每天100mg/kg的头孢克洛(希刻劳)灌胃(用PH7.4的生理盐水配制后为0.2ml/只),1次/d,连续喂养2周;C组:长双歧杆菌灌胃(0.5亿活菌/ml),0.2ml/只,1次/d,连续喂养2周;D组:先头孢克洛0.2ml灌胃,2小时后再灌等量的长双歧杆菌0.2ml,共0.4ml/只,1次/d,连续2周;E组:每天灌以等量的生理盐水(0.2ml/只);A组:实验前不做处理就处死。实验结束后每组随机抽取8只采用断颈法处死动物,取少许新鲜盲肠内容物粪便涂片;采用16SrRNA荧光PCR技术检测盲肠内容物中双歧杆菌、乳酸杆菌、脆弱类杆菌及梭菌的相对含量;免疫组化方法检测末端回肠肠组织中CD4、CD8的表达。 结果 1.肠道菌群的检测 1.1粪便涂片结果显示:对照组粪便中总细菌数量较少,革兰氏阳性杆菌占绝对优势,革兰阴性杆菌数相对少,也有少量的革兰阴性球菌和革兰阳性球菌,呈典型新生鼠菌群分布状态。模型组与对照组相比,肠道细菌总数明显增多,但每组肠道中各类菌群数占总细菌数比率有变化。结果显示:抗生素组与其余四组相比G~+b占肠道总细菌数比率明显下降,G~-b及G~+c占总细菌数比率明显升高差异有显著性(P<0.01);益生菌干预组及生理盐水组相对对照组、益生菌组G~+b占总细菌数的比率下降,G~-b占总细菌数的比率升高差异均有显著性(P<0.01);益生菌干预组与生理盐水组之间、对照组与益生菌组之间各类菌群数占总细菌数比率差异均无显著性;各组G~-c的比率差异无显著性。 1.2各组肠道中四种细菌相对含量的变化:抗生素组与益生菌组、生理盐水组相比BB、LB含量降低,CL含量升高差异有显著性(P<0.05);益生菌干预组与抗生素组相比BB含量升高,CL含量降低差异有显著性(P<0.05);抗生素组与对照组相比CL含量升高,差异有显著性(P<0.05);益生菌组、益生菌干预组、生理盐水组与对照组相比BB含量升高,BF含量降低差异有显著性(P<0.05);益生菌组相对益生菌干预组及生理盐水组BB含量升高差异有显著性(P<0.05);益生菌干预组与生理盐水组相比四种细菌含量差异均无显著性。 2.各组肠组织中CD4、CD8的表达 抗生素组与生理盐水组、益生菌组及益生菌干预组相比CD4、CD8表达受抑制,灰度值增大,差异有显著性(P<0.05);益生菌组与生理盐水组相比CD4、CD8表达增加,灰度值比较差异有显著性(P<0.05);益生菌干预组与生理盐水组相比CD4、CD8表达差异无显著性;对照组除与抗生素组外,与其它三组相比CD4、CD8表达减少,差异有显著性(P<0.05)。 结论1.肠道菌群的正常定植,刺激肠道免疫系统的发育。2.生命的早期使用抗生素(头孢克洛)会减弱或影响肠道菌群的正常定植,引起菌群紊乱,从而抑制肠道免疫系统的发育。3.益生菌(长双歧杆菌)的干预可预防抗生素引起的菌群紊乱,维持肠道菌群的动态平衡,保护肠道免疫系统的正常发育。4.早期口服益生菌能增加肠道中优势菌的数量,促进肠道免疫系统的发育成熟。


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