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大鼠脑缺血再灌注后MMP-9的表达及人工合成E-选择素的干预作用

刘晓勇  
【摘要】: 目的:建立大鼠脑缺血再灌注模型,研究肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)与基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)参与大鼠脑缺血再灌注损伤的机制及二者的关系并进一步探讨人工合成E-选择素对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用的机制。 方法:健康雄性S-D大鼠,体重250-300g,随机分为3组:手术组、假手术组、人工合成E-选择素干预组,每组36只。手术组以线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型。假手术组只将线栓插到颈外动脉、颈内动脉分叉处,其余手术步骤同手术组。干预组在术前5min从股静脉缓慢注射人工合成E-选择素,然后再以线栓法建立脑缺血再灌注模型。手术组和干预组均在术后对大鼠进行神经功能的行为学评分,并将评分为1-3分的大鼠模型纳入实验。每组按术后取标本时间分为2h、6h、12h、24h、48h和72h组。免疫组织化学方法检测大鼠脑组织中TNF-α和MMP-9的表达,并在高倍光学镜下进行计数。RT-PCR检测大鼠脑组织中MMP-9mRNA的表达,检测结果进行比色分析,并计算目的条带与内参条带的比值。采用SAS统计分析软件进行统计分析,分别在α=0.05和α=0.01两个假设检验水平进行统计学检验。 结果:假手术组在各时间点TNF-α、MMP-9及MMP-9mRNA均有少量表达,且不随采集标本的时间点变化而变化。手术组TNF-α在术后2h表达开始升高,6h、12h继续升高,24h达到高峰,48h、72h逐渐下降,各时间点与假手术组比较明显增高(P0.01)。MMP-9的表达在术后6h开始升高,24h达到高峰,48、72h后逐渐下降,2h时间点与假手术组比较无明显差异(P0.05),其余各时间点与假手术组比较明显增高(P0.01)。MMP-9mRNA的表达也在术后6h开始升高,24h达到高峰,48h、72h后逐渐下降。2h时间点与假手术组比较无明显差异,其余各时间点与假手术组比较明显增高(P0.01)。人工合成E-选择素干预组TNF-α的表达变化趋势与手术组一致,但各时间点与手术组比较均有明显下降(P0.01)。MMP-9的表达变化趋势与手术组一致,2h时间点与手术组比较无明显差异(P0.05),其余各时间点与手术组比较均有明显下降(P0.01)。MMP-9mRNA的表达变化趋势与手术组一致,2h时间点与手术组比较无明显差异(P0.05),其余各时间点与手术组比较均有明显下降(P0.01)。 结论:1、大鼠脑缺血再灌注后TNF-α能够在转录水平诱导MMP-9的表达。2、人工合成E-选择素可以降低大鼠脑缺血再灌注后缺血脑组织MMP-9的表达,对缺血再灌注后的脑组织起保护作用。3、人工合成E-选择素降低大鼠脑缺血再灌注后缺血脑组织MMP-9表达的机制可能是:抑制TNF-α对MMP-9mRNA合成的诱导,降低MMP-9的表达。


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