收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

新型紫杉醇脂质纳米粒的临床前实验研究

许玉杰  
【摘要】: 研究背景:紫杉醇是从短叶红豆杉(Taxus brevifolia)的树皮中分离出的新型抗肿瘤药物,其抗肿瘤机制是通过作用于微管抑制增殖细胞的有丝分裂,导致细胞周期阻断于G2/M期,快速分裂的癌细胞因出现生长抑制进而死亡。但因紫杉醇极难溶于水,其溶媒聚氧乙基代蓖麻油长导致严重的过敏反应及超敏反应。所以国内外学者均在致力于紫杉醇的新制剂形式的研究研究。为此,本课题组研究设计将紫杉醇用生物可降解脂质材料包裹,制备成了新型紫杉醇脂质纳米粒子(TAX-NLC),具有具有较高的水溶性和载药量,不含聚氧乙基代蓖麻油与无水乙醇等混合溶媒。初步的研究证实其具有较好的靶向肿瘤特征,可以迅速载带药物进入细胞内,并在胞内浓聚,对肿瘤细胞生长的抑制作用要比游离紫杉醇强,表现出良好的发展前景。因此有必要进一步研究其在体内的分布和代谢特征,评价其抗肿瘤效果,为进入临床研究作准备。 研究目的:建立放射性核素125I标记游离紫杉醇的新方法,将标记物作为示踪剂研究新型紫杉醇脂质纳米粒子(TAX-NLC)在荷瘤鼠和猕猴体内的药代动力学,获得其在体内的分布和代谢特征,并与游离紫杉醇进行对比。在此基础上评价其抗肿瘤疗效。 研究方法:①改良Ch-T标记紫杉醇的方法,先用稳定碘标记后,再用放射性碘去替代,以获得稳定的高放射性比活度的标记物。②制备包含有高放射性比活度标记物的125I标记的新型紫杉醇纳米粒(125I-TAX-NLC),用于动物体内药代动力学研究。③给正常昆明小鼠单次尾静脉注射65mg/m2的125I-TAX后的不同时间点采集静脉血,并解剖动物获得主要的脏器,经过放射性核素示踪结合TCA沉淀法获得各样品的药物浓度,根据荷瘤鼠血液药物浓度与时间的关系通过DAS2.1分析普通游离TAX的药代动力学参数,根据各器官每克组织所含药物量来评价普通游离TAX在体内的分布特征。④给荷瘤鼠单次尾静脉注射75mg/m2的125I-TAX-NLC后的不同时间点采集静脉血,并解剖动物获得主要的脏器,经过放射性核素示踪结合TCA沉淀法获得各样品的药物浓度,根据荷瘤鼠血液药物浓度与时间的关系通过DAS2.1分析TAX-NLC的药代动力学参数,根据各器官每克组织所含药物量来评价TAX-NLC在体内的分布特征,同时用放射自显影术直接观察肿瘤部位的药物蓄积。⑤从左前臂尾静脉单次给猕猴注射75mg/m2的125I-TAX-NLC,在不同时间点从右前臂静脉采集血液,同样经过经过放射性核素示踪结合TCA沉淀法获得各样品的药物浓度,根据荷瘤鼠血液药物浓度与时间的关系,通过DAS2.1分析TAX-NLC的药代动力学参数。使用SPECT显像对125I-TAX-NLC在猕猴的体内分布特征进行动态观察,并通过对各组织器官ROI的半定量分析,计算各主要脏器的药物分布。⑥通过观察荷瘤鼠用TAX-NLC治疗后不同时间点肿瘤的体积变化和肿瘤重量的变化,评价TAX-NLC的抗肿瘤疗效,并使用HE染色和Tunnel方法观察肿瘤组织的死亡与凋亡率,同时体外实验观察新型紫杉醇纳米粒(TAX-NLC)对肿瘤细胞的靶向性。 研究结果:本课题在充分调研的基础上,系统开展了新型紫杉醇纳米粒(TAX-NLC)在动物体内的药代动力学研究,初步开展了对荷瘤鼠的治疗研究,得到了以下结果: ①通过方法学研究,改良Ch-T法标记紫杉醇,标记率可达达60%以上,经过简单的PB液的清洗、离心沉淀纯化后,标记物的放化纯度达95%以上,纯化后的标记产物在血清、乙醇中有较好的稳定性。说明改良Ch-T法是一个合适的标记方法,标记产物能满足动物体内示踪实验。 ②采用放射性核素标记示踪结合TCA沉淀实验进行紫杉醇的代谢动力学分析,是一可靠、简便而灵敏的方法,可以将血液中新型紫杉醇纳米粒(TAX-NLC)中的紫杉醇与释放出来的游离状态的紫杉醇一并测出,它反映的是血浆中紫杉醇的真实水平,所以更加符合实际状况,因此得出的结果更加可靠。游离紫杉醇在体内的分布相半衰期0.183h,消除相半衰期为3.295小时,分布体积V1为0.887 L/m2,清除速率CL为0.356 L/h/m2,AUC(0-t)为172.365 mg/L*h。分布的主要器官是肺、肝、肾、脾等,其中肺部的分布呈现过度高的现象。药物不能通过血脑屏障。 ③与游离紫杉醇比较,新型紫杉醇脂质纳米粒子(TAX-NLC)改变了药物在体内的分布和代谢特征,其在荷瘤鼠体内的代谢符合三室模型,分布相半衰期延长到0.399小时,而消除相的半衰期相似,均为3-4小时;但后者出现了一个缓慢消除相,并且半衰期长达60天,从1室到3室的转移速率常数K13为0.1451/h,比从3室到1室的转移速率常数K31(0.0231/h)要高得多。说明新型紫杉醇脂质纳米粒子(TAX-NLC)确实具备缓慢释放紫杉醇的能力。两者的V1相同,但清除速率CL有较大的变化,从0.356 L/h/m2减少到0.137 L/h/m2,所以AUC(0-∞) 182.64上升到546.135 mg/L*h。主要的分布器官是肝、脾、肺,特别是药物能够通过TAX-NLC的载带,在肿瘤的部位有高度的蓄积分布,最高可达对侧组织的9倍以上,并具备一定的缓释能力,这对于未来用于肿瘤的治疗,具有重大的意义。 ④新型紫杉醇脂质纳米粒(TAX-NLC)在猕猴体内的代谢动力学符合三室代谢模型,分布相半衰期分别是0.105和0.158,比其在荷瘤鼠体内的分布相半衰期要短一倍左右;猕猴体内的分布体积V1分别为1.422和2.678 L/m2,清除速率CL分别为0.1和0.194 L/h/m2,AUC(0-t)分别是614.105、310.473 mg/L*h,两者相差近1倍,有较大的个体差异,比在荷瘤鼠体内的清除速率快、分布容积增加。与荷瘤鼠体内的分布特征一样,肝、脾、肾是主要的分布器官,但与之不同的是肺部的分布较少;未能发现TAX-NLC能通过血脑屏障。胆汁与尿液是主要的排泄途径,两者比例相当。 ⑤TAX-NLC具有较高的载带药物进入细胞能力,随着时间的延长,细胞内TAX浓度明显增加,大概在2小时达到饱和,细胞内外的TAX浓度比值在25倍以上。与游离紫杉醇相比较,新型紫杉醇脂质纳米粒子(TAX-NLC)具有较好的生物适应性,减少了普通紫杉醇制剂对动物的刺激作用。两者的抗肿瘤治疗效果相当,均可以显著抑制肿瘤的生长,但TAX-NLC具有一定的体内控释作用,在停药后,TAX-NLC在体内可以缓慢释放TAX,继续发挥着抗肿瘤的作用,结果与TAX-NLC在荷瘤鼠体内存在三室代谢模型相互吻合。 研究结论:TAX-NLC是一个有临床应用前景的抗肿瘤新药系统。TAX-NLC在体内具有更长的生物半衰期,能够向肿瘤部位靶向富集,但其与一般游离紫杉醇具有相类似的抗肿瘤作用。主要的排泄途径是胆汁和尿液。TAX-NLC有望在更深入的研究基础上,发展成抗肿瘤新药系统。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 王学清,陈真,戴俊东,张涛,夏桂民,张强;不同助悬剂对环孢素A羟丙甲纤维素酞酸酯纳米粒大鼠口服后体内相对生物利用度的影响[J];北京大学学报(医学版);2004年03期
2 陈军,易以木;紫外分光光度法测定胰岛素聚乳酸纳米粒中胰岛素的含量[J];广东药学院学报;2001年04期
3 谭军;王小丽;刘美洲;曾昭武;张蕾;;阿奇霉素聚丁氰基丙烯酸酯纳米粒的制备与高效液相色谱法检测[J];中国医学工程;2007年10期
4 文爱东,陈江浩,吴道澄,赵磊;多柔比星纳米粒在大鼠体内的靶向性分布研究[J];中国抗生素杂志;2001年06期
5 张良珂,侯世祥,毛声俊,宋相容,陈彤;叶酸偶联白蛋白纳米粒的制备工艺研究[J];生物医学工程学杂志;2004年02期
6 张耕,易以木;苦参素磷脂纳米粒的研制[J];中国医院药学杂志;2004年09期
7 张阳德,李浩,李玉坤,龚连生,黄秋,林孙颖,席浩;半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒体外杀伤肝癌细胞的实验研究[J];中华实验外科杂志;2004年09期
8 张阳德,席浩,翟登高,李浩,王荣兵,李玉坤,吴泽建,黄林;半乳糖化磁性白蛋白阿霉素纳米粒与阿霉素对大鼠的毒性比较[J];中华实验外科杂志;2004年10期
9 张阳德,刘新生,张蕾,潘一峰,翟登高,张峰;纳米粒基因载体的研究现状与展望[J];中国现代医学杂志;2004年22期
10 董宝军,王常勇,郭希民,王荣祺,马海霞,董灵芝,范明;口服壳聚糖胰岛素纳米粒的制备及其降血糖作用研究(英文)[J];解放军医学杂志;2005年03期
11 杨彩哲,胡家露,徐梁,吴道澄,张学庸;胰岛素纳米粒对大鼠实验性糖尿病的降血糖作用[J];第四军医大学学报;2001年08期
12 何勤,张志荣,刘戟,徐超群;载TK基因聚丙交酯乙交酯纳米粒的性质及表达研究[J];药学学报;2004年04期
13 刘明星,董静,杨亚江,杨祥良,徐辉碧;雷公藤甲素聚乳酸纳米粒的制备及毒性[J];药学学报;2004年07期
14 王玮,尹宗宁,李铜铃,李毓琦;异硫氰酸荧光素标记的蚓激酶纳米粒的分离[J];河南大学学报(医学科学版);2004年02期
15 王华芳,胡豫,郑金娥,周薇,方峻;阿霉素纳米粒对白血病耐药细胞株K562/DOX耐药逆转作用的研究[J];华中科技大学学报(医学版);2004年03期
16 周旭,全东琴,崔光华,李前,袁海龙 ,高春生;丁酰胆碱酯酶基因-壳聚糖纳米粒初步研究[J];解放军药学学报;2005年01期
17 王梓,栾洁,李长生,陆杨艳,夏强,顾宁;维甲酸纳米粒滴眼液抑制后发性白内障的实验研究[J];东南大学学报(医学版);2005年03期
18 柳时;徐喆;罗智;项光亚;;叶酸偶联壳聚糖纳米粒的制备[J];医药导报;2006年06期
19 李云让;欧阳五庆;;黄藤素纳米粒的制备及体外释药试验[J];黑龙江畜牧兽医;2009年01期
20 王恺源;高永良;;环糊精及其衍生物在纳米粒中的应用[J];中国医药生物技术;2009年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 周函;徐琳;朱光洁;董磊;张俊峰;高下;;聚乙酰亚胺纳米粒转染离体培养C57BL/6J小鼠耳蜗基底膜的实验研究[A];2010全国耳鼻咽喉头颈外科中青年学术会议论文汇编[C];2010年
2 马淑燕;欧阳五庆;刘玉梅;;硫酸长春碱聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒的毒性研究[A];全国动物生理生化第十次学术交流会论文摘要汇编[C];2008年
3 邓联东;蔺晓娜;邢金峰;董岸杰;;聚乙二醇/聚氰基丙烯酸酯嵌段共聚物载药纳米粒的研究[A];天津市生物医学工程学会2008年年会暨首届生物医学工程与临床论坛论文集[C];2008年
4 李树珍;欧阳五庆;;藤黄酸-聚乳酸纳米粒的研制及对肝癌细胞HepG2的体外抑制作用[A];全国动物生理生化第十次学术交流会论文摘要汇编[C];2008年
5 裴澄;李晶明;孙乃学;;环孢霉素A纳米粒对体外兔晶状体上皮细胞增殖的抑制作用[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年
6 段友容;张志荣;;PELGE载药纳米粒在小鼠体内组织分布及药代动力学研究[A];中国生物医学工程学会第六次会员代表大会暨学术会议论文摘要汇编[C];2004年
7 侯静文;张妍婷;郭圣荣;刘黎;;酶催化合成两亲嵌段共聚物聚乙二醇-b-聚酯及其在药剂学中的应用[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
8 段友容;朱思君;王庆瑞;刘洁;张志荣;;PELGE载药纳米粒在小鼠体内组织分布及药代动力学研究[A];2004年中国材料研讨会论文摘要集[C];2004年
9 张慧珠;张其清;;乙酰化普鲁兰多糖的合成、表征及其载药纳米粒研究[A];天津市生物医学工程学会2008年年会暨首届生物医学工程与临床论坛论文集[C];2008年
10 黄伟;崔光华;高钟镐;贺俊峰;周旭;;PicoGreen荧光分光光度法测定载pDNA纳米粒中pDNA的包封率[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 蒋丽琴;胆固醇基普鲁兰自组装纳米粒与肝癌细胞相互作用的研究[D];北京协和医学院;2013年
2 武敬亮;载阿霉素组氨酸修饰透明质酸纳米粒的制备及抗肿瘤研究[D];中国海洋大学;2013年
3 张静;油酰壳聚糖纳米粒作为抗肿瘤药物载体的研究[D];中国海洋大学;2010年
4 陈名懋;选择性胆甾化壳聚糖衍生物纳米药物载体的研究[D];北京协和医学院;2011年
5 陈洁;马铃薯凝集素修饰聚乙二醇—聚(乳酸—羟基乙酸)共聚物纳米粒经鼻入脑的递药特性研究[D];复旦大学;2011年
6 范辉;超分子纳米粒作为抗肿瘤药物和基因协同给药体系的研究[D];浙江大学;2011年
7 李倩;油酰海藻酸纳米粒口服运送载体的制备与性质研究[D];中国海洋大学;2012年
8 李婧炜;噬菌体展示技术筛选脑靶向功能肽及其修饰纳米粒的脑内递药研究[D];复旦大学;2012年
9 张玮;基于微针给药的靶向黑素细胞抗色素沉着纳米粒的研究[D];第二军医大学;2011年
10 张雪琼;羧甲基壳聚糖智能释药肝靶向纳米传递系统的构建与评价[D];武汉理工大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李斌生;载绿色荧光蛋白基因壳聚糖纳米粒载体的制备和转染的研究[D];中南大学;2004年
2 佟媛;载银杏内酯A纳米粒的制备与理化性质研究[D];安徽大学;2010年
3 郭妍;纳米生物技术治疗肝癌:p53-白蛋白纳米粒的制备和转染的研究[D];中南大学;2004年
4 王娜;治疗高尿酸血症UOX脂质纳米粒的初步研究[D];重庆医科大学;2010年
5 张庆莲;米托蒽醌聚乳酸纳米粒的制备和细胞摄取研究[D];成都中医药大学;2011年
6 吉顺莉;紫杉醇PLGA口服纳米粒的制备及生物利用度的研究[D];江苏大学;2010年
7 王同力;Tf-BCNU-PLGA纳米粒制备及其对鼠C6胶质瘤细胞作用的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2010年
8 蒋妮;三种齐墩果酸纳米粒的制备及质量评价[D];大连医科大学;2010年
9 乔伟立;用于两种药物控制释放的纳米粒/静电纺丝复合纤维给药系统的研究[D];重庆大学;2010年
10 应晓英;纳米粒载体与A549肺上皮细胞的相互作用及其体内药效学研究[D];浙江大学;2002年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 解放军总医院病理科 纪小龙;纳米技术在开拓新药中应用前景[N];中国高新技术产业导报;2001年
2 ;磁性阿霉素白蛋白纳米粒在移植性肝癌模型中的磁靶向性[N];中国医药报;2003年
3 记者 白毅;复合物纳米粒可作为胰岛素口服给药新载体[N];中国医药报;2006年
4 本报记者 刘云涛;DDS研发 唱响制剂时代主旋律[N];中国医药报;2007年
5 甘勇 林艳琼 陈庆华;微粒系统用于眼用制剂成新趋势[N];中国医药报;2006年
6 李悦恒张勇;纳米技术广泛用于眼部给药研究[N];中国医药报;2008年
7 本报记者 徐兰山阮湘华;纳米生物:创新在起跑线[N];科技日报;2008年
8 张中桥;四医大西京医院发现纳米粒可作 VEG F基因载体[N];中国医药报;2007年
9 平其能;纳米药物制剂的现状与未来[N];中国医药报;2002年
10 本报记者 刘云涛;前沿 创新 突破[N];中国医药报;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978