收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

氡染毒动物差异表达基因的高通量筛选

李建祥  
【摘要】: 目的:在建立氡染毒动物模型的基础上,筛选和鉴定氡染毒动物外周血细胞、骨髓细胞和气管-支气管上皮细胞差异表达基因,为探讨氡致肺癌的分子机制提供基础资料。 方法:实验用HD-3型多功能移动式氡室,对BALB/c小鼠和Wistar大鼠动态吸入染毒,建立动物模型。按照实验动物吸入氡及其子体的累积剂量分为实验组(100WLM)和对照组(室内本底浓度,0.8WLM),每组4只动物。染毒时间每天8小时,每周6天。通过观察小鼠外周血、骨髓细胞和大鼠外周血的早期生物学指标以及气管-支气管的病理学改变,建立动物模型。取小鼠外周血细胞、骨髓细胞和大鼠气管-支气管上皮细胞,抽提总RNA,采用SMART cDNA和抑制性消减杂交(Suppression SubtractiveHybridization,SSH)技术,构建差异表达基因cDNA文库,TA克隆,选取含有插入cDNA片断的克隆进行反向Northern杂交筛选上调或下调的阳性克隆。阳性克隆的测序结果在GenBank Blast中进行同源性检索,同源性高的序列进行功能分析和生物信息学分析,同源性低的序列提交GenBank。用荧光实时定量PCR对最终得到的部分差异片断进行验证。 结果:动物氡染毒100WLM后,小鼠外周血和骨髓细胞出现计数改变、脂质过氧化损伤和遗传学改变;大鼠外周血SOD活性降低和MDA含量升高,组织学检查出现明显的支气管炎性浸润。运用SMART cDNA和抑制性消减杂交成功构建了消减cDNA文库。挑取白斑1004个,获得837个含有插入片断的单克隆,进行反向Northern杂交,分析基因的上调或下调水平。选取差异表达克隆126个进行测序及生物信息学分析,最终获得44条已知功能或有注释差异基因片断,39条未知功能的已知差异基因片断,24条重复差异基因,19条未知EST,其中未知EST提交至GenBank,获得注册号。44条已知功能或有注释的差异基因的结果提示,筛选出的差别表达基因涉及氧化损伤、细胞增殖、凋亡、DNA损伤和肿瘤发生等多方面的功能。 结论: 1.建立了氡染毒的实验动物模型:构建了外周血细胞、骨髓细胞和气管-支气管上皮细胞的消减cDNA文库。 2.共筛选出44条已知差异基因片断,功能涉及氧化损伤、细胞增殖和凋亡、DNA损伤和肿瘤发生;得到19条未知EST,提交至GenBank获得注册号。 3.氡染毒可引起一系列基因表达的上调或下调,参与病理损伤和致癌过程,具体机理有待进一步研究。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 周津,刘芝华,王秀琴,丁芳,周传农,赵峻,张汝刚,吴旻;食管鳞癌组织中差异表达基因的初步研究[J];云南大学学报(自然科学版);1999年S3期
2 艾军魁,张志文,辛殿祺,朱宏建,严泉剑,辛钟成,那彦群,郭应禄;抑制消减杂交结合cDNA微阵列技术鉴定人肾癌组织高表达基因谱[J];中国科学C辑;2003年05期
3 苏艳蓉,董学员,吴红彦,陈慰峰;抑制消减杂交法筛选原发性肝细胞癌中差异表达的基因及其生物学意义[J];中国生物化学与分子生物学报;2004年01期
4 程起群;抑制消减杂交(SSH)及其在鱼类基因克隆中的应用[J];水产学报;2004年03期
5 胡昌华,鲍朗;抑制消减杂交技术与基因克隆[J];国外医学.遗传学分册;2000年06期
6 梁自文 ,罗向东 ,杨宗城;应用抑制消减杂交克隆内皮细胞内毒素刺激后相关基因[J];解放军医学杂志;2002年04期
7 鲍朗!610041成都,胡昌华!610041成都,李学敏!610041成都,晏菊芳!610041成都,张万江!610041成都,张会东!610041成都;利用抑制消减杂交技术研究钩端螺旋体致病相关基因[J];中华微生物学和免疫学杂志;2001年05期
8 胡为民,程惊秋,李胜富,卢晓风,万琳,李幼平;人外周血单个核细胞与猪内皮细胞相互作用表达上调基因的鉴定[J];四川大学学报(医学版);2003年02期
9 袁灿,吕青兰,陈广文,刘瑛,王尧玲,刘海军,邹江,肖献忠;大鼠心肌缺血预适应诱导表达上调基因的筛选和鉴定[J];生物化学与生物物理进展;2003年03期
10 王涛,陆应麟;抑制消减杂交技术的原理及应用[J];国外医学.分子生物学分册;1998年06期
11 周炜,喻红,肖靖,王光清,林丽珠,赵寿元,李昌本;血管内皮细胞中表达的TNFα诱导基因的分离[J];复旦学报(自然科学版);1999年05期
12 梁自文,杨宗城,罗向东,石富胜;内毒素对培养人脐静脉内皮细胞高能磷酸合成的影响[J];第三军医大学学报;2002年07期
13 马淑华,王升启,范保星,马增春,高月;抑制消减杂交和辐射小鼠血虚模型筛选“四物汤”诱导表达的基因[J];生物技术通讯;2002年02期
14 谢玲,范保星,张开泰,王玉芝,吴德昌;以抑制消减杂交法筛选肿瘤耐药相关基因[J];生物技术通讯;2002年05期
15 刘海燕,胡东,冉宇靓,遇珑,孙立新,刘军,张新宇,杨治华;抑制消减杂交分离肿瘤血管生成相关基因[J];中国生物化学与分子生物学报;2005年01期
16 张晓宁,万由衷,林长发,张亚兰,李彦舫,沈大棱;盐胁迫下盐藻特异表达基因片段的克隆[J];复旦学报(自然科学版);2001年05期
17 梁自文,杨宗城,罗向东;内皮细胞内毒素刺激后差异表达基因的筛选[J];西北国防医学杂志;2002年03期
18 陈忠斌,杨静,王华,孙偶军,王升启;应用抑制消减杂交和cDNA芯片技术筛选流行性感冒病毒感染相关基因[J];病毒学报;2003年01期
19 王丽;沈颂东;李艳燕;孙虹;许璞;;坛紫菜孢子体和配子体世代之间的SSH分析[J];海洋学报(中文版);2008年05期
20 王涛,陆应麟;基因克隆的方法进展[J];生物技术通讯;1998年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 铁轶;罗瑛;隋建丽;张元平;;抑制消减杂交在寻找辐射诱导基因上的应用[A];中华医学会放射医学与防护学分会第二次中青年专题研讨会论文汇编[C];1999年
2 苗立祥;张跃建;蒋桂华;张豫超;;网纹甜瓜由不成熟到成熟过程抑制消减杂交文库的构建[A];纪念全国西瓜甜瓜科研与生产协作50周年暨第12次全国西瓜甜瓜学术研讨会论文摘要集[C];2009年
3 周津;刘芝华;王秀琴;丁芳;周传农;赵峻;张汝刚;吴旻;;抑制消减杂交与反Northern结合分离食管癌差异表达基因的初步研究[A];面向21世纪的科技进步与社会经济发展(下册)[C];1999年
4 江明锋;李校;颜永红;胡国库;张义正;;利用抑制消减杂交和基因芯片技术研究黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysporium)在次生代谢期的基因表达[A];中国的遗传学研究——中国遗传学会第七次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编[C];2003年
5 陈兆羽;徐安英;李木旺;赵云坡;郭秋红;孙平江;钱荷英;张月华;黄勇平;郭锡杰;;家蚕黄血近等基因系抑制消减杂交文库的构建及其ESTs的研究[A];江苏省遗传学会第七届二次代表大会暨学术研讨会论文摘要汇编[C];2008年
6 徐如海;胡锦平;翁经强;褚晓红;戴丽荷;路伏增;黄少珍;;抑制消减杂交筛选仔猪ETEC K88ab/ac受体候选基因[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
7 屈纪富;;抑制消减杂交在干细胞研究及组织修复中的应用[A];第十一次全国急诊医学学术会议暨中华医学会急诊医学分会成立二十周年庆典论文汇编[C];2006年
8 郑邈;刘文励;付劲蓉;孙汉英;周剑锋;;免疫相关性再生障碍性贫血CD4~+T淋巴细胞抑制消减杂交文库的建立[A];第10届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2005年
9 邹丰才;吴绍强;林瑞庆;宋慧群;李明伟;Gasser R B;朱兴全;;抑制消减杂交结合cDNA微阵列芯片技术筛选猪蛔虫性别特异表达基因的研究[A];第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会——2005中国畜牧兽医学会学术年会论文集[C];2005年
10 刘文励;周剑锋;孙汉英;付劲蓉;郑邈;罗莉;徐惠珍;;利用改良抑制消减杂交建立再生障碍性贫血CD4+T细胞的基因差异表达文库[A];第10届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李建祥;氡染毒动物差异表达基因的高通量筛选[D];苏州大学;2007年
2 王冬梅;Lin~-CD_(34)~-细胞cDNA消减文库的构建及Humanin在造血系统中抗凋亡的实验研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2003年
3 邓柳红;巴西橡胶树胶乳特异表达基因分离与克隆[D];华南热带农业大学;2004年
4 赵国庆;糠秕马拉色菌菌丝态和酵母态基因表达差异的研究[D];四川大学;2007年
5 张金强;两条新的肺癌转移相关基因的获取、鉴定与功能研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年
6 袁碧波;大鼠嗅成鞘细胞和雪旺细胞基因表达差异的研究[D];第三军医大学;2004年
7 齐湘杰;高恶性膀胱移行细胞癌与相应正常上皮差异表达基因的克隆及功能研究[D];天津医科大学;2003年
8 牟大鹏;抑制消减杂交技术筛选骨髓间充质干细胞诱导分化前后差异表达基因[D];吉林大学;2007年
9 简华刚;皮肤创伤愈合相关差异表达基因的克隆、筛选及鉴定[D];重庆医科大学;2002年
10 王效义;鼠疫耶尔森氏菌与假结核耶尔森氏菌比较基因组学研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 徐劲松;应用抑制消减杂交技术研究外周血嗜酸细胞支气管哮喘相关基因的差异表达[D];第一军医大学;2004年
2 于冰;利用抑制消减杂交法对甜菜无融合生殖系花期表达基因的研究[D];黑龙江大学;2004年
3 毕延震;杂种一代梅大与亲本大白肌肉组织间差异表达基因的筛选、鉴定及其初步分析[D];华中农业大学;2004年
4 马春泉;利用抑制消减杂交技术寻找无融合生殖相关基因[D];黑龙江大学;2005年
5 季相华;稻水象甲夏季滞育相关基因的分离与鉴定[D];浙江大学;2008年
6 张艳娇;人骨髓间充质干细胞早期和晚期间差异表达基因的鉴定[D];汕头大学;2008年
7 董美钰;应用抑制消减杂交法克隆肾细胞癌与相应正常肾上皮差异表达的基因[D];天津医科大学;2004年
8 胡远辉;幼叶黄化油菜Cr3529抑制消减文库的构建和Toc33基因cDNA的克隆[D];四川大学;2004年
9 张绍军;甜菜M14无融合生殖特异EST鉴定及全长获得[D];黑龙江大学;2005年
10 张健;感染约氏疟原虫大劣按蚊消减文库的构建和差异表达基因的鉴定及分析[D];第三军医大学;2005年
中国重要报纸全文数据库 前2条
1 孙海东;室内氡污染使肺癌发病率骤增[N];人民政协报;2003年
2 ;调查9年证实室内氡污染使肺癌发病率增19%[N];人民政协报;2003年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978