收藏本站
收藏 | 论文排版

自噬在氧化低密度脂蛋白诱导内皮细胞损伤中的作用及其机制探讨

张艳林  
【摘要】: 目的: 观察自噬在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤中的作用,并初步探讨其机制。 方法: 1.运用不同浓度及时间点的ox-LDL处理HUVECs,采用免疫印迹技术检测自噬标记蛋白LC3-II/LC3-I、beclin1及溶酶体相关膜蛋白lamp2a表达,透射电镜观察细胞超微结构,MDC染色自噬囊泡及荧光免疫标记MAP1-LC3,观察ox-LDL对HUVECs自噬水平的影响。通过观察培养上清中T-SOD、MDA含量,并用抗氧化剂维生素C(vitC)、维生素E(vitE)及植物凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)mAb干预,探讨氧化应激及LOX-1受体途径在ox-LDL影响HUVECs自噬水平中的作用。2.在自噬诱导剂雷帕霉素和抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)干预下,通过MTT检测细胞增殖,流式细胞技术检测细胞凋亡、死亡及酶联免疫技术检测培养上清中ET-1、LDH含量,观察自噬对ox-LDL损伤HUVECs的影响。并通过定量HUVECs中Dil标记ox-LDL(Dil-ox-LDL)含量,观察Dil-ox-LDL与MDC、MAP1-LC3和lamp2a的细胞定位情况,初步探讨自噬对ox-LDL损伤内皮细胞作用的机制。3.采用透射电镜观察细胞超微结构,免疫印迹及Real-time PCR技术检测LC3、beclin1和p53蛋白、基因水平的变化,流式细胞技术检测细胞的凋亡、死亡,MTT检测细胞增殖,观察在ox-LDL损伤HUVECs过程中自噬、凋亡及坏死之间的关系。 结果: 1. MDC染色、荧光免疫细胞染色和透射电镜结果均显示ox-LDL给药后可诱导HUVECs发生自噬;免疫印迹技术结果显示,ox-LDL上调HUVECs LC3-II/LC3-I及beclin1蛋白表达的作用在0.5 h和6 h出现两个高峰。ox-LDL作用0.5 h和6 h也能显著上调HUVECs lamp2a蛋白的表达;减少细胞培养上清中T-SOD水平,增加其MDA含量。抗氧化剂vitC和vitE能部分性拮抗ox-LDL诱导的培养上清中T-SOD减少及MDA增加。ox-LDL诱导的LC3-II/LC3-I表达上调能被vitC和vitE抑制,却不能被LOX-1mAb抑制;LOX-1mAb能抑制ox-LDL引起的lamp2a表达上调,而vitC和vitE仅能抑制lamp2a晚期6 h的表达上调。2. ox-LDL作用6 h能被HUVECs大量吞噬,并促进HUVECs增殖,诱导细胞发生自噬、凋亡,增加培养上清中LDH、ET-1含量。3-MA在抑制ox-LDL上调自噬的同时能增加ox-LDL在HUVECs内的蓄积,增加ox-LDL诱导的细胞凋亡,降低细胞的活性。雷帕霉素可逆转其。另外Dil-ox-LDL与MDC、MAP1-LC3和lamp2a发生大量共定位现象,MAP1-LC3与lamp2a的共定位程度在ox-LDL作用组细胞明显高于对照组的。3.暴露于ox-LDL 6 h-24 h的HUVECs在超微结构依次出现以自噬、凋亡、坏死为主要特征的变化。ox-LDL也能上调LC3-II/LC3-I、beclin1、p53蛋白及LC3、beclin1、p53mRNA水平,其中对LC3-II/LC3-I和beclin1的上调高峰(0.5 h和6 h)略早于对p53的上调(1.5 h和12 h)。3-MA在抑制ox-LDL上调HUVECs LC3、beclin1基因、蛋白表达的同时,能增加ox-LDL诱导的细胞凋亡、促进细胞死亡;凋亡抑制剂z-vad-fmk在抑制ox-LDL诱导HUVECs p53基因、蛋白表达上调的同时,也能抑制ox-LDL诱导的LC3、beclin1基因、蛋白表达上调,对ox-LDL诱导的HUVECs增殖产生抑制作用。6 h时间点上调自噬能在不影响HUVECs凋亡、坏死的情况下,抑制ox-LDL诱导的细胞增殖。 结论: ox-LDL能促进HUVECs增殖,并诱导其发生自噬、凋亡和坏死。ox-LDL对HUVECs的损伤与其被细胞吞噬后的降解障碍有关。自噬诱导剂雷帕霉素能通过减少ox-LDL在HUVECs的聚集,抑制ox-LDL诱导的细胞增殖及细胞因子异常分泌,从而对ox-LDL所致的HUVECs损伤起保护作用。抑制自噬则会通过增加ox-LDL在细胞的集聚,增加ox-LDL诱导的凋亡,促进细胞死亡,进一步加重ox-LDL诱导的细胞损伤。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 李君;龙林梅;雷陈;梁中琴;;自噬在神经胶质瘤放化疗中的作用及其分子调控机制研究进展[J];中国药理学与毒理学杂志;2011年01期
2 强强;马建芳;王晓强;潘静;赵开军;孙青芳;卞留贯;;大鼠全脑缺血再灌注损伤后海马自噬相关蛋白Beclin 1的表达变化[J];中国微侵袭神经外科杂志;2009年04期
3 孔晓霞;张宏宇;康劲松;;Bcl-2在H_2O_2诱导神经胶质瘤自噬中的作用[J];中国病理生理杂志;2010年10期
4 崔侨;田代真一;小野寺敏;池岛乔;;冬凌草甲素通过诱导人宫颈癌HeLa细胞自噬下调凋亡的机制[J];药学学报;2007年01期
5 陈亮;辛钟成;郭应禄;;Leydig细胞睾酮合成功能和自噬调控[J];中国男科学杂志;2007年11期
6 刘全;王建军;潘永成;孟利峰;詹曦;郑庆丰;;Beclin1在非小细胞肺癌中的表达及临床意义[J];肿瘤防治研究;2008年03期
7 贾勇圣;刘彦明;王会珍;张丹参;;程序性细胞死亡与循环经济[J];河北北方学院学报(医学版);2008年06期
8 杨光;祝元刚;杨慧;;雷帕霉素抗神经退行性病研究进展[J];基础医学与临床;2008年12期
9 钟春林;陈丽;;自噬在心脏疾病中的研究[J];国际心血管病杂志;2009年05期
10 杨光明;高鹏;郑杰;;自噬——程序性细胞死亡的执行者与管理者[J];医学综述;2010年14期
11 李冬娜;梁幼生;周永华;张焕相;沈海英;骆伟;龚唯;诸葛洪祥;;刚地弓形虫速殖子与鼠星形胶质细胞体外共培养的实验观察[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2010年04期
12 陆立鹤;颜建云;于汇民;刘筱霭;;自噬参与氧化性低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞钙化[J];中山大学学报(医学科学版);2010年06期
13 刘慧慧;曹勇军;张艳林;杨亚萍;刘春风;;纤维蛋白诱导的自噬促进人脐静脉内皮细胞增殖与血管腔样结构形成[J];江苏医药;2011年16期
14 胡雯,朴英杰;秋水仙素对大鼠肝细胞溶酶体自噬作用的超微结构及细胞化学观察[J];第一军医大学学报;1989年04期
15 齐丽莎;孙保存;;细胞自噬及其在肿瘤发生过程中的作用[J];国际肿瘤学杂志;2006年12期
16 梁德森;田茂霖;吕海涛;汪大伟;李正天;;三氧化二砷在体外抑制结肠癌细胞的研究(英文)[J];哈尔滨医科大学学报;2007年05期
17 付校;潘永成;王建军;刘全;杨光海;李劲松;;自噬在长春瑞滨诱导的肺癌细胞A549死亡中的作用[J];中国肺癌杂志;2008年03期
18 何才姑;钱长晖;黄玉梅;江澍;;自噬在大鼠坐骨神经横切后施万细胞去分化中的作用[J];福建中医学院学报;2009年05期
19 黄新;白红民;陈亮;李宾;卢亦成;;自噬相关基因Beclin1在星形细胞瘤中的表达及意义[J];中国微侵袭神经外科杂志;2009年12期
20 单国用;刘兴安;张松;侯继院;;食管鳞状细胞癌组织中自噬基因Beclin 1蛋白的表达[J];郑州大学学报(医学版);2010年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 韦雪;漆永梅;张迎梅;;镉、活性氧自由基与自噬发生的分子机制[A];中国活性氧生物学效应学术会议论文集(第一册)[C];2011年
2 李康生;代剑平;;病毒感染与细胞自噬[A];新发和再发传染病防治热点研讨会论文集[C];2011年
3 王平;;骨骼肌自噬及运动对其影响机制研究进展[A];2011年中国生理学会运动生理学专业委员会会议暨“运动与骨骼肌”学术研讨会论文集[C];2011年
4 胡占英;张靖溥;孟杰;佟军威;秦伟;;斑马鱼自噬途径与帕金森病的相关性[A];2011年中国药学大会暨第11届中国药师周论文集[C];2011年
5 陈永;邹珅珅;谢志平;梁永恒;;酿酒酵母中的小G蛋白Ypt51对细胞自噬的影响[A];“细胞活动 生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集[C];2011年
6 ;自噬改变在锰诱导的PC12细胞毒性中的作用[A];中国毒理学会第三届中青年学者科技论坛暨2011年全国前列腺药理毒理学研讨会论文集[C];2011年
7 高俊玲;洪铭岩;王焕;李冉;田艳霞;都灵杰;崔建忠;;大鼠弥漫性脑创伤后脑皮质神经元自噬的变化[A];中国解剖学会2011年年会论文文摘汇编[C];2011年
8 邹珅珅;陈永;刘玉涛;谢志平;梁永恒;;酿酒酵母中的Trs130参与细胞自噬的研究[A];“细胞活动 生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集[C];2011年
9 陈加祥;伍一军;;溶血磷脂酰胆碱促进人成神经瘤SH-SY5Y细胞自噬[A];全国生化/工业与卫生毒理学学术会议论文集[C];2010年
10 胡帅尔;杨杏芬;黄俊明;周静;沈汉明;;穿心莲内酯对自噬及顺铂诱导细胞凋亡的影响[A];中国毒理学会第三届中青年学者科技论坛暨2011年全国前列腺药理毒理学研讨会论文集[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 谢莹;晚期糖基化终产物诱导内皮细胞中的自噬[D];苏州大学;2011年
2 易聪;乙酰化在自噬过程中的功能和分子机制的研究[D];清华大学;2012年
3 曾蓉;饥饿诱导的自噬在多发性骨髓瘤细胞中的特点及冬凌草甲素作用的机制研究[D];华中科技大学;2011年
4 张俊;自噬在肺缺血再灌注损伤中的作用及其机制研究[D];华中科技大学;2013年
5 郑芳;两种小分子化合物调节自噬及其相关生物学功能的研究[D];中国科学技术大学;2012年
6 张艳林;自噬在氧化低密度脂蛋白诱导内皮细胞损伤中的作用及其机制探讨[D];苏州大学;2010年
7 吴雅春;自噬在结肠癌及胃癌细胞体外药物干预过程中的作用研究[D];浙江大学;2010年
8 蔡增林;Dynein在α-synuclein自噬性清除中的作用[D];苏州大学;2010年
9 肖荣;自噬在严重烧伤早期心肌损害中的作用及其机制研究[D];第三军医大学;2012年
10 刘波;乙型肝炎病毒通过干扰溶酶体成熟抑制细胞自噬性降解途径[D];浙江大学;2013年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 涂芊茜;自噬在脂肪酸诱导肝损伤中的作用及机制的初步研究[D];第二军医大学;2011年
2 陈哲;自噬在人骨髓间充质干细胞放射损伤过程中的作用研究[D];兰州大学;2011年
3 张晓延;肠道病毒71型诱导细胞自噬、凋亡及相互调控关系的研究[D];北京协和医学院;2011年
4 冯文峰;血小板中自噬发生及功能研究[D];浙江大学;2012年
5 高灵素;自噬对多发性骨髓瘤细胞生存及增殖的影响及其可能机制[D];苏州大学;2012年
6 周蜜;自噬与慢性阻塞性肺疾病[D];重庆医科大学;2013年
7 李媛媛;奥沙利铂诱导人肝癌细胞株自噬潮的增加及其对细胞活力的影响[D];安徽医科大学;2013年
8 刘宣宣;镉诱导人肝肾细胞自噬及相关蛋白作用初步研究[D];南京师范大学;2013年
9 陈清凤;工频磁场对中国仓鼠肺成纤维细胞自噬的诱导作用[D];浙江大学;2011年
10 解艳艳;肿瘤细胞自噬与肿瘤细胞抗药性机理的初步研究[D];山东大学;2012年
中国重要报纸全文数据库 前6条
1 张明永;水稻自噬基因研究取得新进展[N];广东科技报;2011年
2 记者白毅;介入细胞自噬过程可减轻缺血性脑损伤[N];中国医药报;2009年
3 记者 胡德荣;肝癌患者自噬性缺陷表型与预后不良紧密相关[N];健康报;2008年
4 记者 白毅;北大揭示抑癌因子抗肿瘤新机制[N];中国医药报;2010年
5 记者 任海军;卵巢癌为何常常复活?生死命悬一基因[N];新华每日电讯;2009年
6 任海军;美找到卵巢癌易复发原因[N];大众卫生报;2009年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978