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自体骨髓源干细胞动员对大鼠急性心肌梗死治疗作用的实验研究

范春琴  
【摘要】: I目的:初步探讨自体骨髓源干细胞动员对大鼠急性心肌梗死的治疗作用及其机制。 方法:采用粒细胞集落刺激因子(G-CSF)皮下注射动员自体骨髓源干细胞,观察其对心肌梗死动物模型的影响。选择SD大鼠90只,开胸结扎左冠状动脉前降支制作急性心肌梗死模型,随机分为3组:A组为双时相G-CSF动员组:第一时相于模型制备3h后皮下注射生理盐水稀释的G-CSF 40μg/kg/d,连续注射5d(第0-4d),第二时相于第7d开始,再连续注射5d(第7-11d);B组为单时相G-CSF动员组:仅于模型制备3h后连续5d皮下注射G-CSF,剂量同A组;C组为对照组:于模型制备3h后连续5d皮下注射等量生理盐水。对各组大鼠采用累积法5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)腹腔注射,剂量为50 mg/kg/d,术前2d开始连用7d。3组大鼠分别于不同时间点采血,流式细胞术检测外周血CD34+/WBC的变化趋势、酶联免疫法(ELISA)检测血清血管内皮生长因子(VEGF)变化;不同时间点心脏超声检测心功能后取心脏,三苯基氯化四氮唑(TTC)染色法测定心肌梗死面积,苏木精-伊红(HE)染色法观察心肌组织病理变化,免疫组织化学法检测梗死区域CD34+细胞、BrdU阳性细胞、Ⅷ因子的表达,原位末端标记法(TUNEL)原位标记检测细胞的凋亡。 结果:双时相G-CSF骨髓源干细胞动员组心肌梗死大鼠外周血CD34+/WBC比例明显升高,最高为0.508±0.030 %,持续1w左右维持在正常值4~7倍的水平;血清中VEGF表达水平提高,最高为20.23±0.51 pg/ml,同其它各组比较,差异有统计学意义(P0.05)。28d后双时相动员组心肌梗死大鼠左室射血分数为68.96±5.79 %,较单时相组52.80±3.21 %和对照组40.22±3.79 %均明显改善,心肌梗死面积小,病理损伤程度轻,凋亡细胞减少,梗死区及周边区心肌中可见有CD34+细胞、BrdU阳性细胞的高表达和较高的新生血管密度,差异有统计学意义(P0.05)。 结论:①双时相G-CSF动员更优于单时相动员;②双时相骨髓源干细胞动员可以有效促进血清中血管内皮因子表达水平的提高,促进梗死区及周边区心肌血管新生;③双时相骨髓源干细胞动员可以减少心肌梗死后心肌细胞的凋亡,减轻心肌的损伤,改善心功能。


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