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sCD40L联合LY294002对胃癌AGS细胞生长及侵袭转移影响的实验研究

汤美  
【摘要】: 第一部分sCD40L对胃癌AGS细胞生长的影响 目的探讨sCD40L(可溶性CD40配体)对胃癌AGS细胞体外生长和凋亡的影响。 方法采用不同浓度sCD40L处理胃癌AGS细胞,四氮唑盐(MTT)法检测AGS细胞经sCD40L作用后生存率的变化,流式细胞术(FCM)检测AGS细胞周期和凋亡的变化。 结果MTT结果显示一定浓度的sCD40L可抑制AGS细胞的生长,并随着浓度的增加和作用时间的延长而明显增强(P0.05)。流式细胞术显示AGS细胞经sCD40L作用48h后,细胞周期阻滞于G1期,G1期细胞比例上升,S期细胞比例下降,并呈现浓度依赖性(P0.05),AGS细胞经sCD40L作用48h后,细胞无明显的凋亡现象(凋亡率5%)。 结论sCD40L通过阻滞细胞周期抑制胃癌AGS细胞生长,作用呈时间和剂量依赖性。 第二部分LY294002对胃癌AGS细胞生长的影响 目的探讨LY294002(PI3K/Akt信号通路特异性阻断剂)对胃癌AGS细胞体外生长和凋亡的影响。 方法采用不同浓度LY294002处理胃癌AGS细胞,MTT法检测AGS细胞经LY294002作用后生存率的变化,流式细胞术检测AGS细胞周期和凋亡的变化。 结果MTT结果显示一定浓度的LY294002可抑制AGS细胞的生长,并随着浓度的增加和作用时间的延长而明显增强(P0.05)。流式细胞术显示AGS细胞经LY294002作用48h后,细胞周期阻滞于G1期,G1期细胞比例上升,S期细胞比例下降,AGS细胞有明显凋亡,并呈现浓度依赖性(P0.05)。 结论LY294002通过阻滞细胞周期及诱导细胞凋亡抑制胃癌AGS细胞的生长,且呈时间和剂量的依赖性。 第三部分sCD40L联合LY294002对胃癌AGS细胞生长及侵袭转移的影响 目的探讨sCD40L联合LY294002对胃癌AGS细胞体外生长及侵袭、转移的影响,并初步探讨其可能的作用机制。 方法MTT法检测sCD40L(2ug/ml)、LY294002(20μmol/L)及两者联合应用对AGS细胞生长的影响;流式细胞术观察AGS细胞凋亡和细胞周期的变化;透射电镜检测AGS细胞形态变化;Transwell实验和划痕实验分析AGS细胞侵袭、转移能力的改变;免疫印迹法(Western blot)检测AGS细胞PI3K、p-Akt、VEGF蛋白的表达。 结果(1)MTT结果显示,sCD40L和LY294002均能抑制胃癌AGS细胞生长,两者联合作用后具有协同效应(P0.05);(2)流式细胞术显示,LY294002及sCD40L均可阻滞AGS细胞周期,两者联合作用细胞周期阻滞明显增强(P0.05),sCD40L对AGS细胞凋亡无明显影响,LY294002可诱导AGS细胞凋亡,两者联合作用后细胞凋亡明显增加(P0.05);(3)透射电镜检测显示,对照组及sCD40L组AGS细胞未出现明显的凋亡形态学改变,而联合用药组的部分细胞出现细胞核固缩,染色质呈新月状边集等凋亡形态学改变;(4)Transwell实验和划痕实验显示sCD40L及LY29400均可抑制AGS细胞的侵袭、转移,两者联合作用后对AGS细胞的侵袭、转移抑制明显增强(P0.05);(5)Western blot结果显示,与对照组相比,sCD40L组AGS细胞PI3K、p-Akt蛋白表达明显升高,LY294002组与联合用药组AGS细胞PI3K、p-Akt蛋白表达明显降低(P0.05),sCD40L组和LY294002组AGS细胞VEGF蛋白表达降低,两者联合作用AGS细胞VEGF蛋白表达更加降低(P0.05)。结论CD40信号活化后通过介导PI3K/Akt信号活化拮抗其诱导的机体抗胃癌效应, LY294002可显著增强sCD40L对胃癌AGS细胞生长和侵袭转移的抑制作用。


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