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~(18)F-FDG细胞结合实验早期评价化疗对人乳腺癌细胞株Bcap37及Bcap37/MDR1抑制作用的实验研究

肖汉  
【摘要】: 第一部分~(18)F-FDG与人乳腺癌细胞株Bcap37结合实验方法学研究 目的:建立~(18)F-FDG与人乳腺癌细胞株Bcap37结合实验的方法学。 方法:在不同条件下测定~(18)F-FDG与人乳腺癌细胞株Bcap37结合率。(1)细胞数分别为1.25×10~5、2.5×10~5、5×10~5、1×10~6、5×10~6和1×10~7个/瓶;(2)反应时间分别为20、40、60、80、100和120min;(3)~(18)F-FDG放射性活度分别为1.85、3.7、7.4、14.8和29.6KBq;(4)葡萄糖的浓度分别为葡萄糖的浓度为0、1.39、2.78和5.5mmol/L时。用γ测量仪测量细胞的CPM计数(B)及上清液CPM计数(F)。计算~(18)F-FDG的细胞结合率(%)[B/(B+F)]。 结果:(1)改变细胞结合条件:①当其它条件不变,细胞数量为1.25×10~5、2.5×10~5、5×10~5、1×10~6、5×10~6和1×10~7/瓶时,结合率分别为(6.00±1.46)%、(13.14±1.32)%、(16.74±2.11)%、(33.82±3.70)%、(36.03±4.33)%和(37.40±4.23)%,从1.25×10~5~1×10~7/瓶,结合率随细胞数量的增加而增加,2.5×10~5与5×10~5/瓶之间结合率差异无统计学意义;1×10~6、5×10~6与1×10~7/瓶之间结合率差异无统计学意义,余各组之间差异有统计学意义(F=75.895,P0.05)。②当其它条件不变,反应时间分别为20、40、60、80、100和120min时,细胞结合率分别为(14.78±3.26)%、(21.86±3.25)%、(24.14±2.30)%、(27.03±3.97)%、(34.09±1.96)%和(35.00±1.85)%。40min与60、80min结合率差异无统计学意义,100min与120min结合率差异无统计学意义,余各组之间差异均有统计学意义(F=35.594,P0.05)。③当其它条件不变,~(18)F-FDG放射性活度分别为1.85、3.7、7.4、14.8和29.6KBq时,细胞结合率分别为(38.09±5.81)%、(38.07±1.36)%、(38.84±3.54)%、(35.81±1.21)%和(36.88±2.79)%,各组之间差异无统计学意义(F=3.477,P0.05)。④当其它条件不变,葡萄糖的浓度为0、1.39、2.78和5.5mmol/L时,细胞结合率分别为(35.41±1.95)%、(25.93±2.17)%、(15.40±5.53)%和(2.38±0.93)%。各组之间差异均有统计学意义(F=100.739,P0.05)。 (2)乳腺癌Bcap37细胞与~(18)F-FDG的细胞结合最佳条件:每瓶1×10~6个细胞、加入3.7KBq~(18)F-FDG、葡萄糖浓度为0mmol/L、反应时间100min,细胞结合率为(34.09±1.96)%。 结论:建立了~(18)F-FDG与人乳腺癌细胞株Bcap37结合实验的方法学,为~(18)F-FDG结合实验早期评价化疗对人乳腺癌细胞株Bcap37抑制作用及与其耐药细胞株 Bcap37/MDR1的比较研究奠定了基础。第二部分耐药人乳腺癌细胞株Bcap37/MDR1及其亲本细胞株Bcap37 ~(18)F-FDG细胞结合实验的比较研究 目的:对耐药人乳腺癌细胞株Bcap37/MDR1与其亲本细胞株Bcap37 ~(18)F-FDG结合率进行比较。 方法:在不同条件下分别测定~(18)F-FDG与耐药人乳腺癌细胞株Bcap37/MDR1和其亲本细胞株Bcap37的结合率。(1)细胞数分别为1.25×10~5、2.5×10~5、5×10~5、1×10~6、5×10~6和1×10~7个/瓶;(2)反应时间分别为20、40、60、80、100和120min;(3)~(18)F-FDG放射性活度分别为1.85、3.7、7.4、14.8和29.6KBq;(4)葡萄糖的浓度分别为0、1.39、2.78和5.5mmol/L时。用γ测量仪测量细胞的CPM计数(B)及上清液CPM计数(F)。计算~(18)F-FDG的细胞结合率(%) = [B/(B+F)]。并行两者差异的比较。 结果:(1)改变细胞结合条件:①当其它条件不变,细胞数量为1.25×10~5、2.5×10~5、5×10~5、1×10~6、5×10~6和1×10~7/瓶时,结合率分别为Bcap37(6.00±1.46)%、(13.14±1.32)%、(16.74±2.11)%、(33.82±3.70)%、(36.03±4.33)%和(37.40±4.23)%;Bcap37/MDR1(2.24±0.7)%、(5.00±0.63)%、(11.58±1.62)%、(20.74±2.19)%、(24.41±2.31)%和(28.98±1.95)%。Bcap37结合率均高于Bcap37/MDR1,两组差异有统计学意义(P0.05)。②当其它条件不变,反应时间分别为20、40、60、80、100和120min时,细胞结合率分别为Bcap37(14.78±3.26)%、(21.86±3.25)%、(24.14±2.30)%、(27.03±3.97)%、(34.09±1.96)%和(35.00±1.85)%;Bcap37/MDR1(6.35±1.87)%、(12.18±0.42)%、(15.92±2.19)%、(18.59±1.29)%、(21.73±1.27)%和(23.32±1.37)%。Bcap37结合率均高于Bcap37/MDR1,两组差异有统计学意义(P0.05)。③当其它条件不变,~(18)F-FDG放射性活度分别为1.85、3.7、7.4、14.8和29.6KBq时,细胞结合率分别为Bcap37(38.09±5.81)%、(38.07±1.36)%、(38.84±3.54)%、(35.81±1.21)%和(36.88±2.79)%。;Bcap37/MDR1(18.98±0.76)%、(19.53±1.11)%、(19.56±0.76)%、(19.7±0.7)%和(19.27±0.68)%。Bcap37结合率也均高于Bcap37/MDR1,两组差异有统计学意义(P0.05)。④当其它条件不变,葡萄糖的浓度为0、1.39、2.78和5.5mmol/L时,细胞结合率分别为Bcap37(35.41±1.95)%、(25.93±2.17)%、(15.40±5.53)%和(2.38±0.93)%;Bcap37/MDR1(19.82±2)%、(14.97±1.88)%、(11.90±1.51)%和(2.07±0.77)%。葡萄糖的浓度为0和1.39mmol/L时两组细胞间结合率差异均有统计学意义(P0.05),葡萄糖的浓度为2.78和5.5mmol/L时,两组细胞间结合率差异均无统计学意义(P0.05)。 (2)乳腺癌Bcap37/MDR1细胞与~(18)F-FDG的细胞结合最佳条件:每瓶1×106个细胞、加入3.7KBq~(18)F-FDG、葡萄糖浓度为0mmol/L、反应时间100min,细胞结合率为(19.53±1.11)%。 结论:建立了~(18)F-FDG与人乳腺癌细胞株Bcap37/MDR1结合实验的方法学,其最佳条件与其亲本细胞Bcap37相同,但结合率明显低于Bcap37(P0.05)。在各种实验条件下,耐药人乳腺癌细胞Bcap37/MDR1的~(18)F-FDG细胞结合率均低于其亲本细胞Bcap37,表明耐药肿瘤细胞的增殖及代谢均低于其亲本肿瘤细胞,为~(18)F-FDG结合实验评价化疗药物对耐药人乳腺癌细胞及其亲本细胞的抑制作用奠定了基础。 第三部分~(18)F-FDG细胞结合实验早期评价化疗对人乳腺癌细胞株Bcap37及Bcap37/MDR1的抑制作用的实验研究 目的:通过~(18)F-FDG细胞结合实验和MTT实验,早期评价化疗对人乳腺癌细胞Bcap37和Bcap37/MDR1的抑制作用。 方法:(1)用MTT法测定Bcap37和Bcap37/MDR1细胞的OD值(吸光度),并绘制Bcap37细胞和Bcap37/MDR1细胞的生长曲线。(2)用MTT法检测不同浓度(分别为10、20、50、100mg/L)阿霉素20μL分别作用于Bcap37细胞和Bcap37/MDR1细胞48小时后细胞增殖抑制率。抑制率=(1-药物OD值/对照OD值)×100%。(3)MTT法检测不同浓度(分别为10、20、30、60mmol/L)吉西他滨20μL分别作用于Bcap37细胞和Bcap37/MDR1细胞48小时后细胞增殖抑制率。(4)不同浓度(分别为0、10、20、50、100mg/L)阿霉素200ul和不同浓度(分别为10、20、30、60mmol/L)吉西他滨200μL分别作用Bcap37细胞和Bcap37/MDR1细胞24小时后,进行~(18)F-FDG细胞结合实验,计算细胞结合率。(5)计算不同浓度(分别为10、20、50、100mg/L)阿霉素200ul和不同浓度(分别为10、20、30、60mmol/L)吉西他滨200μL分别作用Bcap37细胞和Bcap37/MDR1细胞24小时后~(18)F-FDG细胞结合抑制率。~(18)F-FDG细胞结合抑制率=(对照组细胞结合率-实验组细胞结合率)/对照组细胞结合率。 结果:(1) MTT实验,不同浓度阿霉素作用于Bcap37和Bcap37/MDR1细胞,每个浓度组两种细胞的抑制率差异均有统计学意义(P0.05),不同浓度吉西他滨作用于Bcap37和Bcap37/MDR1细胞,每个浓度组两种细胞的抑制率差异均没有统计学意义(P0.05); (2) ~(18)F-FDG细胞结合实验,不同浓度阿霉素对Bcap37及Bcap37/MDR1细胞作用,每个浓度组比较,两种细胞~(18)F-FDG细胞结合抑制率差异均有统计学意义(P0.05)。不同浓度吉西他滨与Bcap37及Bcap37/MDR1细胞作用,每个浓度组比较,两种细胞~(18)F-FDG细胞结合抑制率差异均没有统计学意义(P0.05); 结论:(1)人乳腺癌细胞Bcap37对阿霉素和吉西他滨治疗敏感;人乳腺癌细胞Bcap37/MDR1对吉西他滨治疗敏感,而对阿霉素治疗不敏感。 (2)~(18)F-FDG细胞结合实验可用于早期测定及评价阿霉素及吉西他滨对人乳腺癌细胞Bcap37和Bcap37/MDR1的抑制作用。可作为早期判断化疗疗效和肿瘤细胞耐药的指标之一。


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