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基于分子印迹分离纯化绿原酸与荧光仿生识别技术研究

顾晓红  
【摘要】: 分子印迹技术是从仿生角度,采用人工方法制备对模板分子具有专一性结合作用的聚合物的技术。分子印迹聚合物在分离提纯、免疫分析、酶模拟以及生物模拟传感器等许多方面显示出广泛的应用前景。 本论文对两种新型分子印迹聚合物,即绿原酸磁性印迹聚合微球(MIPMs)和三聚氰胺荧光仿生识别聚合物膜的制备方法及吸附性能进行了较认真的系统的研究,并获得了良好的结果。论文的主要内容如下: (1)对分子印迹技术的基本原理、方法和应用做了比较全面的综述,对分子印迹技术未来的发展趋势进行了分析和展望。 (2)选用自制的Fe3O4纳米粒为磁性组分,绿原酸为模板分子,甲基丙烯酸为功能单体,三羟甲基丙烷三丙烯酸酯为交联剂,采用水包油包水多重乳液悬浮聚合法制备了MIPMs。采用透射电子显微镜、红外光谱、热重分析、振动样品磁强计对其形态、大小、组成和磁性能进行了表征。优化了MIPMs的制备、洗脱和吸附条件;采用静态平衡吸附实验研究了MIPMs的吸附性能,发现其对模板分子表现出较好的特异性吸附,进一步的Scatchard分析表明其存在两类不同类型的结合位点。考察了MIPMs的吸附动力学性质和再生性能。最后,将MIPMs实际应用于金银花提取液中绿原酸活性成分的分离纯化,对中药复杂体系中有效组分的分离纯化具有潜在的应用前景。 (3)首先在相转移催化剂聚乙二醇600的存在下,以固体氢氧化钾为碱性试剂合成了α取代的具有可聚合双键的β-二酮配体,而后同甲基丙烯酸和模板分子三聚氰胺一起与稀土金属铕配位,形成具有可聚合端基双键、性能优良的铕多元配位复合物荧光载体。然后,将该荧光载体与聚合单体苯乙烯在热引发下共聚形成荧光性能的分子探针粘稠液,涂布于经过硅烷化处理的玻片上,制成三聚氰胺荧光仿生识别膜,其对三聚氰胺具有一定的仿生识别和检测功能。采用紫外光谱、红外光谱、核磁共振氢谱、热重分析、荧光光谱等对所制备的新型β-二酮配体、铕多元配位复合物和荧光仿生识别膜进行了一系列分析与表征。优化了荧光仿生识别膜的制备方法,经模板分子的洗脱和再吸附,研究其对三聚氰胺的分析特性及应用。本试验充分利用了分子印迹技术,并于荧光分析相结合,大大提高了对三聚氰胺的检测能力,方法简单,操作方便,敏感性好、适应性广、成本低,易于推广和普及。


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