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晚期糖基化终末产物对肾小球系膜细胞瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)表达的影响

姚兴梅  
【摘要】: 背景:糖尿病的发病率正在逐年增加,而在终末期肾功能衰竭的患者中,糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)所占的比例也已增至15%。DN是糖尿病主要并发症之一,发病机制及其复杂,晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products, AGEs)为其之一,目前研究较多。DN病理特征包括胞外基质(extracellular matrix, ECM)增多,肾小球基底膜(glomerular basement menbrane, GBM)增厚等。在DN的病理生理过程中,肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cells, GMC)最为活跃。钙离子为第二信使,参与很多生物学作用,包括GMC收缩,分泌功能,增生及凋亡等。已有报道GMC增生时往往伴有系膜细胞膜离子通道启闭的改变,进一步研究GMC膜离子通道特性,对从离子通道角度寻找防治糖尿病肾病具有重要意义。瞬时受体势(transient receptor potential, TRP)是一种新发现的细胞膜上的阳离子通道,主要通过的为Ca2+,瞬时受体势C(transient receptor potential canonical, TRPC)是TRP家族主要成员之一。目前研究表明TRPC6与肾脏疾病有关,主要是在足细胞方面,与家族性局灶性节段性肾小球硬化(focal segmental glomerulosclerosis, FSGS),蛋白尿等密切相关,与DN的研究较少见。转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)是一种多功能,具有多向调节功能的生长因子,介导了DN肾小球肥大和硬化。本课题研究AGEs是否影响GMCTRPC6的表达及其与TGF-β1的关系。 目的:观察AGEs对体外培养的大鼠GMC TRPC6表达的影响,及其与TGF-β1的关系,进一步探讨AGEs在糖尿病肾病中的发病机制。 方法:原代培养大鼠肾小球系膜细胞,3代后GMC分为实验组AGE-BSA组和对照组BSA组,刺激24小时,收集细胞,提取蛋白质,应用免疫印迹和免疫荧光技术检测TRPC6的表达;同样3代后GMC实验组予TGF-β1(10ng/ml)处理,设阴性对照,免疫印迹,RT-PCR和免疫荧光技术检测TRPC6的表达。 结果:1.免疫荧光显示GMC表达TRPC6,以细胞膜表达为主。 2.不同剂量AGE-BSA,BSA对GMC TRPC6蛋白表达的影响:BSA处理组不同浓度组比较,无统计学意义(p0.05);AGE-BSA处理组TRPC6表达水平随浓度升高逐渐下降,有统计学意义(p0.05),且呈剂量依赖性。 3.与BSA处理组相比,免疫荧光显示AGE-BSA处理组TRPC6蛋白表达减少。 4.与正常组相比,TGF-β1处理组TRPC6核酸和蛋白表达水平下降(p0.05)。 5.与正常组相比,免疫荧光显示TGF-β1处理组TRPC6蛋白表达减少。 结论:GMC表达TRPC6,以细胞膜表达为主;AGEs诱导GMC TRPC6表达下调,TGF-β1引起GMC TRPC6表达减少,AGEs又能诱导GMC TGF-β1表达上调,提示AGEs可能部分通过TGF-β1途径引起TRPC6表达减少。


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