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江苏省猪链球菌血清2型菌株耐药性与分子特征研究

谈忠鸣  
【摘要】:背景:猪链球菌(Streptococcus suis, S. suis),一种重要的人兽共患病病原菌。根据菌体荚膜多糖的多样性,猪链球菌被分为35个血清型,其中猪链球菌血清2型(Streptococcus suis serotype 2)是毒力最强也是世界范围内引起人和猪感染发病的主要病原菌,同时也是国内最常见的致病血清型。近几年猪链球菌血清2型菌引起关注不仅仅是因为越来越多的严重人间感染猪链球菌的报道,而且广泛出现猪链球菌多重耐药的报道。因此了解江苏省高致病性猪链球菌血清2型菌株的耐药情况及分子特征对于人感染猪链球菌病的防控和治疗具有重要意义。方法:1.收集江苏省1998-2010年间人感染及相关的高致病性猪链球菌血清2型菌株,同时收集相关流行病学资料。2.根据美国临床和实验室标准协会(Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI)标准用K-B纸片法(K-B Disk Diffusion test)对临床常用的14种抗菌药物进行耐药性研究。3.采用PCR方法对猪链球菌血清2型菌株大环内酯类抗生素耐药基因(ermA、ermB和mefA)、四环素耐药基因(tet(M),tet(O),tet(W)、tet(O/W/32/O)、tet(L)、tet(K)和转座子Tn916)和氨基糖苷类抗生素耐药基因(Aph3’)进行检测分析。4.采用PCR方法检测猪链球菌血清2型菌株的6种毒力基因(cps2j, mrp, ef, sly, gapdh,fbps),了解毒力基因的携带情况。5.运用多位点序列分型(Multilocus sequence typing, MLST)和多位点串联重复序列分析(Multiple-locus variable number tandem repeat analysis, MLVA)两种分子分型方法对江苏省猪链球菌血清2型菌株进行分子分型并与国内外参考菌株进行聚类分析。结果:1.1998-2010年江苏省共收集到高致病性猪链球菌血清2型菌株27株。其中从病人体内分离到19株(19/27,70.4%),从病死猪及猪肉产品中分离到8株(8/27,29.6%)。2.分离株对链霉素和四环素的耐药率最高,为100%,其次为复方新诺明,耐药率为40.74%,对红霉素和阿奇霉素的耐药率为11.11%和7.41%;江苏省猪链球菌血清2型菌株均对青霉素、头孢类和氟喹诺酮类敏感。3.26株菌中存在tet(M)基因,在tet(M)基因阴性的菌中检测到tet(O)基因;所有菌株均携带转座子Tn916;所有菌株中均未发现氨基糖苷类耐药基因(Aph3')和大环内酯类耐药基因(ermA、ermB和mefA)。4.本研究中所有江苏省猪链球菌血清2型分离株均携带6种毒力基因(cps2j+mrp+ef+sly+gapdh+fbps)。5.26株菌的MLST基因型为ST7型(1-1-1-1-1-1-3),只有JS-26号菌为ST-1型(1-1-1-1-1-1-1)。6. MLVA方法将菌株分为13个基因型,大部分等位基因差异集中在TR9基因上。结论:1.1998年至2010年,江苏省共收集到高致病性猪链球菌血清2型菌株27株。其中1998年(10株)和2005年(5株)分离到的菌株居多,这两年也是国内人感染猪链球菌病的高峰期。南通地区分离到的菌株较多(19株),这可能与当地政府、卫生、农林部门对此病较重视,经验较丰富有关,也可能当地猪中猪链球菌感染情况较严重。2.江苏省猪链球菌分离株对氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类及磺胺类药物都具有较强的耐药性,这可能与此四类抗生素在全球生猪产业中的广泛使用甚至滥用有关。本研究中菌株均携带可产生核糖体保护蛋白的四环素耐药基因(tet),这结果和表型结果相一致。本研究中猪链球菌株均不携带氨基糖苷类抗生素耐药基因Aph3'(3’-磷酸转移酶)基因和大环内酯耐药基因(ermA、ermB和mefA),可能与其他的耐药基因或耐药机理有关。3.本研究中所有菌株均携带6种毒力基因(cps2j+mrp+ef+sly+gapdh+fbps),从基因水平说明所有菌株为强毒株。4.本研究结果显示26株江苏分离株为ST7型,此型也是引起1998年江苏省和2005年四川猪链球菌病暴发的分子型,同时是国内人感染猪链球菌的优势基因型。2010年从南通病人体内分离到的一株菌(JS-26)为STl型,2014年盐城一病人疑似被ST1型猪链球菌感染,说明江苏省同时存在ST1型和ST7型高致病性猪链球菌,应在以后的监测中密切关注基因型的变化。5.本研究发现MLVA方法分辨率更高,其聚类分析结果与流行病学调查结果一致,可用于猪链球菌疫情的病因溯源追踪。


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