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上皮性恶性肿瘤外周血微转移检测及微转移基因芯片研制

郭英  
【摘要】: 【目的】通过联合检测CK19、CK20、CEA、CD44v6在肿瘤患者外周血循环有核细胞中表达,结合临床病理资料综合分析,探究上皮性肿瘤标志物与微转移的关系。初步探讨微转移基因芯片的可行性。 【方法】应用RT-PCR法联合检测83例上皮性恶性肿瘤患者外周血单个核细胞CK19、CK20、CEA、CD44v6mRNA表达情况;另取15例上皮性肿瘤组织为阳性对照,15例非肿瘤患者外周血为阴性对照。设计、制备含CK19、CK20、CEA、CD44v6探针的芯片,任取上述病例中15例,不对称荧光PCR获取单链后与之杂交,激光共聚焦显微镜分析杂交结果。 【结果】 实验组CK20阳性表达率34/83(41.0%);CK19阳性表达率30/83(36.1%); CEA阳性表达率40/83(48.2%); CD44v6阳性表达率44/83(53.0%)。 多基因检测时,至少一项阳性表达率为59% ~ 85.5%;多基因同时表达可增加实验结果特异性。 15例恶性肿瘤组织中CK19、CK20、CEA、CD44v6全部表达;15例非肿瘤患者外周血CEA、CK19各2例表达;1例 CK20表达;5例CD44v6表达。 15例随机样本的基因芯片检测结果与PCR电泳结果一致。 【结论】CK19、CK20 、CEA、CD44v6 mRNA可作为检测上皮性肿瘤外周血微转移的靶基因。联合检测肿瘤患者外周血CK19、CK20、CEA、CD44v6 mRNA可提高外周血循环癌细胞的检测率。两个或以上基因同时表达特异性强。基因芯片技术可用于检测微转移。


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