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体外构建人工复合皮的动物实验研究

梁志为  
【摘要】:【目的】体外构建一种含有角质形成细胞和血小板衍化生长因子(PDGF)基因转染的成纤维细胞的复合皮肤,并将此种复合皮移植到动物皮肤缺损模型, 观察创面愈合的效果。 【方法】在体外利用已制备的无细胞异种(猪)真皮基质、培养的角质形成细胞和PDGF基因转染的成纤维细胞构建三种类型复合皮:A 型,培养的角质形成细胞+无细胞猪真皮基质(CK+AX);B型,培养的角质形成细胞+无细胞猪真皮基质+培养的成纤维细胞(CK+AX+Fb);C型,培养的角质形成细胞+无细胞猪真皮基质+PDGF基因转染的成纤维细胞(CK+AX+PFb)。通过相差显微镜观察、组织切片HE染色等方法进行检测。分别将三型复合皮分成A、B、C三组,进行动物移植实验,观察皮片存活率、创面收缩率、真皮血管化程度等,并与单纯角质形成细胞膜片移植组(D组)和用凡士林纱布覆盖的对照组(E组)进行比较。 【结果】体外培养后2w, C型复合皮HE染色显示有4层以上的角质形成细胞,有基底膜形成,并有轻度角质化。移植术后2w, 与其他各组相比,B、C两组成活率高,复合皮与创面边缘融合较好,与基底贴附紧密,尤以C组情况好;E组呈结痂愈合。移植后6w,C组创面愈合好,表面光滑,弹性较好,抗摩擦性强,收缩不明显。D组愈合后成活不稳定,皮片薄,质脆,表面不光滑,抗摩擦性差,有部分创面愈合后再度形成创面,各组均无毛发生长。创面收缩率:D、E两组收缩最为明显,A、B组次之,C组收缩最少(P0.05)。存活率:除C、D两组间差异显著外(P0.05),余各组间存活率无显著性差异。但与其他各组相比,C组复合皮完全存活数较多,未存活数少。血管化情况:移植后2w,C组真皮浅层内可见较多新生毛细血管长入,B组次之,A 组毛细血管长入较少(P0.05);移植后4w各组真皮浅层内毛细血管数逐渐增加,但C组毛细血管数仍明显高于A、B两组;移植后6w,各复合皮内毛细血管数差异不显著(P﹥0.05)。 【结论】用角质形成细胞和PDGF基因传染的成纤维细胞在无细胞异种?(猪)真皮上培养来构建复合皮,经组织学检查、动物移植实验,证实构建的复合皮具有良好的结构,能够迅速血管化,创面修复后具有良好的形态。


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