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NO介导的结肠癌LoVo细胞与内皮细胞相互作用在肿瘤血管生成中作用的研究

樊翔  
【摘要】: 研究目的 1.观察结肠癌LoVo细胞对内皮细胞增殖的影响。 2.观察结肠癌LoVo细胞与内皮细胞相互作用对NO产生、NOS活力、促血管生成因子和信号通路分子表达及内皮细胞形态学的影响,探讨这种细胞间相互作用在肿瘤血管生成中的作用。 3.明确NO在结肠癌LoVo细胞与内皮细胞间相互作用中的介导作用,及L-NAME的干预。 4.建立体外研究肿瘤血管生成的实验模型。 研究方法 1.利用结肠癌LoVo细胞条件培养液培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),并设对照组、L-NAME干预组和L-NAME对照组,培养0h、24h、48h后,用MTT法检测各组HUVECs增殖情况。 2.采用双层共培养方法,建立结肠癌LoVo细胞与HUVECs相互作用模型,设HUEVCs自身共培养对照组、L-NAME干预组和L-NAME对照组,培养0h、12h、24h、36h、48h后采用分光光度比色法检测共培养上清中NO含量和NOS的活力,观察共培养的HUVECs形态学改变,采用免疫细胞化学法、Western Blotting分别检测HUVECs中VEGF、MMP-2、EMMPRIN、IGFBP-7及NF-κBp65表达情况。 研究结果 1.条件培养组HUVECs增殖活力明显强于对照组(P0.05),L-NAME干预组HUVECs增殖活力较条件培养组下降(P0.05),L-NAME对照组HUVECs的增殖情况与对照组相比没有明显差异(P0.05)。 2. HUVECs与结肠癌LoVo细胞共培养时,共培养上清中NO含量、NOS的活力明显强于对照组(P0.05),L-NAME干预组培养上清中NO含量降低、NOS的活力显著降低(P0.05),L-NAME对照组与对照组相比没有明显差异(P0.05)。 3. HUVECs与结肠癌LoVo细胞共培养时,HUVECs中VEGF、MMP-2、EMMPRIN、IGFBP-7表达较对照组增高(P0.05),NF-κBp65活化;L-NAME干预组上述因子表达较共培养组降低(P0.05),NF-κBp65的活化受到抑制;L-NAME对照组与对照组相比没有明显差异(P0.05)。 4. HUVECs与结肠癌LoVo细胞共培养时,HUVECs形态明显改变,形成大量管样结构,对照组HUVECs形态多呈圆形、多边形,未见管样结构形成;L-NAME干预组HUVECs为圆形或多边形,管样结构基本消失;L-NAME对照组HUVECs形态与对照组相比没有明显差异。 研究结论 1.LoVo细胞能够促进内皮细胞增殖。 2.LoVo细胞与内皮细胞之间存在异常的相互作用,这种异常相互作用促进肿瘤血管生成。 3.NO是LoVo细胞与内皮细胞间相互作用的关键信号,NO可能通过活化NF-κB信号通路,上调促血管生成因子的表达。


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