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非清髓移植后致敏供者淋巴细胞输注的实验研究

张琰  
【摘要】: 目的本课题旨在研究非清髓外周造血干细胞移植(PBSCT)后混合嵌合体经输注致敏供者淋巴细胞,对于嵌合状态、移植物抗宿主病(GVHD)及免疫重建等方面的影响,并探讨其可能机制。 方法以TBI结合CTX对C57BL/6小鼠进行预处理,回输经rhG-CSF动员后的BALB/C小鼠造血干细胞,建立非清髓性异基因PBSCT混合嵌合体模型,然后回输经受鼠皮肤致敏的或未致敏的供鼠淋巴细胞,观察其表型变化及造血重建;对肝脏、皮肤、小肠等器官行病理检查,结合一般情况判断GVHD情况;以聚合酶链反应技术(PCR)对受鼠嵌合状态进行半定量分析;通过混合淋巴细胞反应(MLR)及流式细胞术检测T细胞亚群评价移植后免疫状态。数据资料以(x|-)±s表示,用SPSS10.0统计软件对数据进行统计分析。判断均数差异显著性,P0.05差异有统计学意义,P0.01差异有显著的统计学意义,P0.05差异无统计学意义。 结果C组致敏后的DLI受鼠(黑色)无一例出现GVHD,造血恢复较未致敏DLI组慢,60天时转变为CC,表型明显呈现为供鼠(白色)特征,CD4~+/CD8~+比值在DLI后早期下降,半月后有所升高,但仍低于正常水平,60天的MLR显示供受者间的特异性免疫低反应性;B组未致敏的DLI受鼠出现不同程度的GVHD,嵌合率有所上升,仍表现为MC,CD4~+/CD8~+比值在DLI后早期升高,后期降至正常水平,MLR虽呈供者特异性免疫低反应性,但较致敏后DLI组增高。 结论TBI联合CTX预处理后输注经rhG-CSF动员后的外周造血干细胞,可以成功的建立小鼠非清髓性PBSCT模型;DLI对于移植后促进嵌合率的提高具有重要意义;致敏后DLI促进受者形成稳定持久CC的同时降低GVHD发病率;CD4~+/CD8~+T细胞比率及MLR供受者间特异性免疫低反应性与嵌合率及GVHD发病率间具有一定相关性。


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