收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

巴氏毕赤酵母基因工程菌高密度发酵表达重组人源胶原蛋白

刘斌  
【摘要】:胶原蛋白具有良好的生物相容性、低免疫原性和可生物降解性等优良特性,因而在生物医药、组织工程、食品、化妆品等领域有着广泛的应用。目前市售的胶原蛋白产品主要是采用酸碱水解法或酶解法从动物皮、骨等组织中提取。由于这些方法制取的产品存在的固有缺陷使其在作为医药、生物医学材料或药物载体等方面的应用受到很大限制。本文利用现代生物技术,通过基因工程菌表达和制备重组人源胶原蛋白,主要研究内容如下: 1.利用本实验室构建的巴氏毕赤酵母基因工程菌表达重组人源胶原蛋白,采用超声波法低温间歇处理破碎细胞,通过SDS-PAGE检测确定重组人源胶原蛋白的表达形式。 2.采用响应面法(response surface methodology, RSM)优化巴氏毕赤酵母摇瓶发酵条件。 3.基于甲醇营养型毕赤酵母在发酵罐中表达外源蛋白的特点,利用响应面法优化的发酵条件,在3.7L自控发酵罐和12.5L自控发酵罐上进行高密度发酵工艺优化。对优化工艺条件下的高密度发酵进行动力学分析,建立了甲醇诱导表达阶段的菌体生长模型、产物形成模型和基质消耗模型。 4.采用硫酸铵盐析法、Q-Sepharose Fast Flow阴离子交换树脂柱层析(?)(?) SephadexG100凝胶过滤层析组合方法、一步Sephadex G100凝胶过滤层析三种方案对表达产物进行分离纯化。 5.利用氨基酸分析仪、MALDI-TOF-MS,紫外光谱、红外光谱、圆二色谱以及扫描电镜等仪器对纯化后的表达产物重组人源胶原蛋白进行结构表征,并对其进行水溶性、成膜性能、黏度以及生物活性检测以考察其作为生物医学材料等方面应用的潜质。 6.利用模拟空间环境,在高磁场和微重力条件下,探讨巴氏毕赤酵母基因工程菌表达重组人源胶原蛋白的生物学效应。 7.利用表达产物重组人源胶原蛋白与壳聚糖复合制备生物医学纳米材料,通过红外光谱、扫描电镜和透射电镜等仪器对其分析表征。 本文利用巴氏毕赤酵母基因工程菌优化表达重组人源胶原蛋白,其表达量达19.49g/L,处于目前国内外领先水平;获得了针对重组人源胶原蛋白最佳纯化方法,其中一步Sephadex G100凝胶过滤层析方案工艺简单,处理量大,是一种较为理想的重组人源胶原蛋白二聚体分离纯化的方法;探索了巴氏毕赤酵母基因工程菌表达重组人源胶原蛋白在模拟空间环境下的生物学效应;研究了利用表达产物制备生物医学纳米材料的方法。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 汪小锋;王俊;杨江科;闫云君;;微生物发酵生产脂肪酶的研究进展[J];生物技术通报;2008年04期
2 张彩;王郡甫;刘金生;许晓群;张建华;张捷;冯进波;田志刚;;重组人白细胞介素15工程菌高密度发酵条件探讨[J];中国生化药物杂志;2007年01期
3 汪嵘,赵颖怡,张云开,韦宇拓,林莹;高密度培养基因工程菌的条件优化[J];广西农业生物科学;2002年01期
4 陈颖;张峻;李明春;齐欣;唐柳;;海藻糖合酶基因工程菌的高密度发酵策略[J];食品研究与开发;2009年06期
5 郭美锦,庄英萍,储炬,张嗣良,刘志敏;重组巴氏毕赤酵母高密度发酵表达rHSA[J];微生物学报;2002年01期
6 侯文洁;范代娣;薛文娇;张卫刚;鱼麒麟;;重组类人胶原蛋白Ⅱ的表达与纯化[J];中国医药工业杂志;2006年07期
7 李德华;苟兴华;胡海洋;徐琦;刘忠荣;吴洽庆;余晓东;;牛肠激酶基因工程菌的构建、高密度发酵、纯化及活性鉴定[J];应用与环境生物学报;2006年06期
8 宋磊;刘红军;刘宁;;重组人白细胞介素-18工程菌的培养及高密度发酵[J];齐鲁药事;2007年01期
9 谢子文;王红宁;;毕赤酵母工程菌产植酸酶补料分批发酵研究[J];中国酿造;2007年06期
10 马晓轩;范代娣;骆艳娥;米钰;;类人胶原蛋白基因工程菌高密度发酵过程控制[J];西北大学学报(自然科学版);2006年02期
11 郭美锦,庄英萍,吴康华,储炬,张嗣良;基因工程菌Pichia pastoris高密度发酵表达重组人血清白蛋白[J];华东理工大学学报;2002年01期
12 李洪淼;王红宁;许钦坤;;重组巴斯德毕赤酵母高密度发酵表达植酸酶[J];中国生物工程杂志;2005年S1期
13 李洪淼,王红宁,许钦坤;毕赤酵母高密度发酵研究进展[J];生物技术通讯;2005年02期
14 熊盛,谢秋玲,王一飞,邓宁,粟宽源;HBscFv毕赤酵母工程菌的中试发酵及产物纯化[J];华南理工大学学报(自然科学版);2005年01期
15 胡志明,马骊,周明乾,孟民杰,杨介钻,王小宁;重组人血管内皮细胞生长因子工程菌高密度发酵工艺研究[J];第一军医大学学报;2005年03期
16 周园;陈维多;王大勇;苏云明;;重组人α-2b干扰素发酵及粗提条件的优化研究[J];黑龙江医药;2006年01期
17 韩继超,崔慧斐;应用巴氏毕赤酵母高效表达基因工程药物的策略[J];齐鲁药事;2005年01期
18 赵方庆,唐志红,林凡,鲍莉,秦松,窦昌贵;表达rAPC大肠杆菌的高密度发酵及纯化产物的抑瘤活性[J];高技术通讯;2003年02期
19 杨如燕,李民,陈常庆;基因工程菌高密度发酵液中碳源物质甘油的定量检测及其浓度的优化控制[J];工业微生物;1999年01期
20 周涟,罗进贤,张添元;血管生成抑制素基因工程大肠杆菌的高密度发酵研究[J];微生物学报;2003年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 李廷慧;高天文;李春英;王秋枫;孙东杰;;酪氨酸酶蛋白在巴氏毕赤酵母表达的初步研究[A];2003中国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2003年
2 王杰鹏;刘沛溢;韩晋军;李晓楠;谭天伟;;高密度发酵生产S-腺苷-L-蛋氨酸发酵条件的优化[A];微生物与人类健康科技论坛论文汇编[C];2009年
3 佟玉品;詹美云;鲁健;白玉;毕胜利;;巴氏毕赤酵母表达的戊型肝炎病毒结构区ORF2蛋白免疫原性研究[A];中华医学会第七次全国感染病学术会议论文汇编[C];2001年
4 杨永清;韩英素;高辉;王艳萍;;重组风味强化肽在巴氏毕赤酵母中的表达及分析[A];第一届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(下)[C];2004年
5 李勤;黄建安;李娟;张玥;刘仲华;;γ-谷氨酰转肽酶基因工程菌的构建及其产酶条件的初步研究[A];第六届海峡两岸茶业学术研讨会论文集(摘要)[C];2010年
6 崔莉;谭树华;吴梧桐;;重组水蛭素Ⅲ的工程菌的培养及高密度发酵[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2003年学术交流会论文摘要集[C];2003年
7 宋留君;孔毅;周长林;;高密度发酵的影响因素[A];第一届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(下)[C];2004年
8 陆庆泉;沈志强;刘吉山;柴家前;;鸡致病性大肠杆菌高密度发酵条件优化的研究[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十一次学术研讨会论文集[C];2002年
9 孙福在;唐朝荣;赵廷昌;张新建;;利用冰核基因构建促冻杀虫基因工程菌研究进展[A];中国植物病理学会第七届代表大会暨学术研讨会论文摘要集[C];2002年
10 林晨露;李强;刘亚飞;王波;;产GL-7ACA酰化酶基因工程菌的高活性表达[A];第三届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(上)[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘斌;巴氏毕赤酵母基因工程菌高密度发酵表达重组人源胶原蛋白[D];南京理工大学;2012年
2 马骊;人血管内皮生长因子及其受体Flt-1功能域在巴氏毕赤酵母中的表达和生物学活性的研究[D];第一军医大学;2000年
3 周世水;重组人源抗HBsAg单链抗体—干扰素γ在巴氏毕赤酵母中表达的研究[D];华南理工大学;2003年
4 田海山;重组人角质细胞生长因子-2(rhKGF-2)高密度发酵、纯化及其工程化研究[D];吉林农业大学;2011年
5 熊盛;重组人源抗HBsAg单链抗体在大肠杆菌和巴氏毕赤酵母中的表达、纯化与性质鉴定[D];华南理工大学;2002年
6 迟雷;基于过程控制优化的重组大肠杆菌高密度发酵研究[D];西北大学;2011年
7 刘芳;分解肌酐、尿酸基因工程菌的构建及其功能研究[D];中南大学;2012年
8 郑大勇;完全人源化基因工程抗体anti-HBsAg Fab原核体系表达纯化工艺路线放大可行性研究[D];第一军医大学;2004年
9 罗晖;基因工程菌的构建及制备7-氨基头孢烷酸的研究[D];清华大学;2003年
10 张彦新;高表达尿毒素分解酶基因工程菌的构建及酶活性测定[D];中南大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 雷云霆;重组人源胶原蛋白在巴氏毕赤酵母中的表达、纯化、鉴定[D];南京理工大学;2012年
2 陈震球;基因工程菌pTrcHis2A-hTNF-α-JM109生产人肿瘤坏死因子α的研究[D];暨南大学;2002年
3 郑敏;血小板生成素基因定点突变及其在毕赤酵母中的表达[D];首都师范大学;2000年
4 王海宾;多聚羟基烷酸的代谢调控与基因工程菌的构建[D];山西大学;2003年
5 陆文渊;茶氨酸生物合成基因工程菌发酵工艺的研究[D];中国农业科学院;2008年
6 张欣;重组人心肌肌红蛋白基因工程菌的构建及重组蛋白的初步纯化[D];中国协和医科大学;2008年
7 李玉彬;重组人心肌肌钙蛋白Ⅰ基因工程菌的构建[D];中国协和医科大学;2007年
8 刘建成;L-精氨酸发酵条件研究[D];石河子大学;2008年
9 田永;碱性木聚糖酶基因在大肠杆菌中的表达及重组木聚糖酶的特性[D];山东轻工业学院;2009年
10 胡永飞;cglI基因复合体在构建钝齿棒杆菌抗噬菌体菌株中的应用研究[D];辽宁大学;2007年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报记者 操秀英;新型基因工程菌:“吃”完农药就“自杀”[N];科技日报;2009年
2 胡左;高密度发酵技术助益生菌产业化[N];中国食品质量报;2010年
3 记者 陆旭升通讯员 朱婵;我市14个项目列入省级农业科技成果转化资金项目[N];金华日报;2008年
4 主持人:彭电子 中国畜牧报专刊部主任,《东方畜牧周刊》常务副主编;为安全,饲用抗生素前景黯淡[N];中国畜牧报;2002年
5 本报记者 李清理;从实验室到产业化的跨越[N];中国证券报;2000年
6 段慧;齐河企业向科技“掘金”[N];德州日报;2009年
7 吴茗;新型特种酶令纺织品改性[N];中国纺织报;2005年
8 ;通过成果鉴定“饲用基因工程酶研究与新产品开发”[N];湖北科技报;2006年
9 记者  郇靖海;我市一批企业通过引智增后劲[N];徐州日报;2006年
10 何国庆 张灏;基因工程 在酶制剂生产中的应用(上)[N];中国食品报;2009年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978