产耐高温纤维素酶细菌的筛选及酶学性质研究

【摘要】：纤维素酶的研究对利用具有巨大潜力的可再生资源——纤维素有重要意义。实验筛选出了产耐高温纤维素酶的细菌菌株，获得了有良好耐热性的纤维素酶，并对筛得的菌株的生理生化特性及所产酶的酶学特性进行了研究。实验利用柴草进行高温堆肥，采样后用半限制性培养基筛选，筛选过程中，用3，5—二硝基水杨酸比色法测量所产纤维素酶活，并通过测不含菌体的发酵液酶活，来判断所产是否为胞外酶，结果筛得一株能产胞外耐高温纤维素酶的菌株。通过菌体观察实验、菌体运动性实验、V-P实验、甲基红实验、淀粉水解实验、过氧化氢酶生成测定实验、碳源利用实验等，对筛得的菌株进行分类鉴定，初步判定其属于嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)。利用盐析、凝胶过滤层析等方法对纤维素酶进行分离纯化，用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检验，电泳结果中出现多条带，而Native—聚丙烯酰胺凝胶电泳结果只显示一条带，初步判定其为多亚基结构，至少有八个亚基。论文研究了该菌所产纤维素酶的最适温度、pH值、稳定性、酶活影响因子及Km值，确定其最适温度在60℃～70℃之间，最适pH值为7.0。用薄层层析的方法，将酶促反应产物与标准样进行比较，鉴定酶促反应产物，结果显示产物主要为葡萄糖。