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透明质酸的生物合成及其纯化

丁霞  
【摘要】:本文分别对种子培养基和发酵培养基进行优化,确定了以淀粉为碳源的培养基培养兽疫链球菌NJUST01。最佳种子培养基成分为:可溶性淀粉1.7%;酵母浸出粉2.0%;KH_2PO_41.0%;K_2HPO_41.0%;MgSO_4·7H_2O1.0%;pH7.0(自然),35℃培养18h。并用此培养基进行了60代传代培养,实验证明传代后菌株及其生产HA的能力没有明显改变。分别对发酵培养基的C/N、无机盐、添加剂、接种量、时间、溶氧量、pH等方面进行优化。最终确定最佳发酵培养基:可溶性淀粉4%;酵母浸出粉1.5%;KH_2PO_41.0%;K_2HPO_41.0%;MgSO_4·7H_2O1.0%;CaCO_31.0%;MnSO_40.06%;(NH_4)_2SO_40.06%;pH7.0(自然),35℃培养36h,接种量为10%,转速250转/分。 本文比较了不同分离纯化发酵产HA的方法,最终确立了以冷藏去蛋白质,CPC选择性沉淀得到HA产品的提取纯化工艺。最终得到HA产量为3.5g/L,分子量为2.047×10~5Da。 本论文测试了外源HA对抗生素抑制链球菌的效果,结果表明在培养基中加HA后,抗生素的抑菌效果有一定程度的提高。


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