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固相合成胸腺素α1

程虎  
【摘要】: 固相多肽合成技术是现代蛋白质化学研究的一项关键技术,对现代分子生物学和基因工程研究具有重大影响和意义。 本文首先简单介绍了固相多肽合成的基本原理、研究现状、存在的主要问题及解决措施以及多肽合成中使用的检测方法。通过对Fmoc定量检测方法、水杨醛检测方法以及红外光谱法进行研究和比较,确定Fmoc方法作为C端氨基酸与树脂连接效率的定量检测方法。 胸腺素α1(thymosinα1)是Goldstein等1977年首次在小牛胸腺组织提取物胸腺素第五组分(TF5)中分离出来的一种多肽,含28个氨基酸,分子量3108,等电点4.2,其N端Ser乙酰化,氨基酸序列: Ac-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn 胸腺素α1主要作为一种免疫增强药物,主要用于乙型肝炎的治疗,具有广阔的国内外市场。通过比较国内外在胸腺素α1的各种合成方法,结合本实验室的条件,采用以HMP树脂为合成载体,Fmoc-氨基酸为原料,在PE公司的ABI433A型多肽合成仪上来合成胸腺素α1。实验主要分为四个部分: 1. 保护胸腺素α1-HMP树脂复合物的合成 采用ABI433A型多肽合成仪的FastMoc1.0mmol化学合成策略,在20℃下反应合成胸腺素α1,结果表明,根据树脂增重计算,最终合成效率为81.9%。 2. 保护胸腺素α1-HMP树脂复合物的切割 通过对多种不同切割试剂进行比较,选择最佳切割条件:95% TFA/2.5%TES/2.5%H_2O(V/V/V)为切割试剂,室温下反应1.5h。 3. 胸腺素α1的分离纯化 在AKTA Explore100型蛋白纯化系统上进行纯化,采用了大连依利特反相C18柱,紫外220nm检测,通过比较,确定采用下面缓冲:A,25mmol 醋酸钠缓冲,pH 7.1;B,乙腈,在该洗脱条件下,最终产品纯度最高达95.53%。 4. 胸腺素α1的性质鉴定 HPLC分析结果表明纯化后的胸腺素α1纯度为95.53%。质谱分析图给出了胸腺素α WP=4 1的三电荷峰1037.8、双电荷峰1555.0。氨基酸分析结果也和理论上一致。证明合成的就是胸腺素α1。


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