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极大螺旋藻胞内活性物质的分离和分析研究

张威  
【摘要】:以原产于非洲乍得湖的极大螺旋藻(Spirulina maxima)藻粉为材料,经热水提取、乙醇沉淀、丙酮、乙醚脱水,获得极大螺旋藻胞内多糖粗品(IPS),得率9.8%(w/w);粗品用活性炭脱色,再经等电点沉淀、结合胰蛋白酶水解后透析等方法脱蛋白,获得胞内多糖半精品(Intracellular polysaccharide,IPS),得率5.0%(w/w);再经DE-52、Sephadex G-100柱层析纯化,同时以苯酚-硫酸法鉴定,得到两种单一组分的多糖精品:IPS A和IPS B,得率分别是1.3%(w/w)和1.0%(w/w),用Sephadex G-200及苯酚-硫酸法紫外光谱进行纯度测定,初步证明它们都是纯品。利用HPLC、IR、凝胶过滤法、硫酸-咔唑法、硫酸比浊法等方法测定其组成、初步结构及其各种理化性质,结果显示:IPS A的平均相对分子质量为238KD,主要单糖组成为L-岩藻糖、L-鼠李糖、D-木糖、D-甘露糖(摩尔比为1.0:0.62:0.99:0.013),硫酸根含量为26.3μg/mg,糖醛酸含量为13.4μg/mg;IPS B的平均相对分子质量为34KD,主要单糖组成包括D-木糖、L-鼠李糖、D-果糖、D-葡萄糖、L-岩藻糖、D-半乳糖(摩尔比为0.011:0.84:1.0:0.051:0.026:0.0043),硫酸根含量为21.5μg/mg。极大螺旋藻胞内多糖IPS A和IPS B,组成虽然略有不同,相对分子质量相差也很大,但含有相似的官能团和相似的结构。 另外,在室温下抽提藻粉,抽提液经羟基磷狄石(HA)层析、Sephadex G-100层析纯化,可得藻兰蛋白(PC)和别.藻兰蛋白(APC),其中藻兰蛋白又含有两种成分PC A和PC B,得率分别为1.9%(w/w)和2.6%(w/w),APC得率为2.2%(w/w);不溶物再经80℃热水抽捉,环流泡沫法去蛋白,经Sephacryl S-100凝胶层析,得到一种极大螺旋藻糖蛋白,得率为3.52%(w/w);极大螺旋藻糖蛋白再通过SDS-PAGE电泳,测得这种糖蛋白的十口对分子质量为136KD;红外光谱显示这种多糖可能含有α-型糖苷键,并且通过β消去反应证实了螺旋藻糖蛋白中的糖苷键属于0-型糖肽键。


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