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石榴籽和石榴皮生物活性成分的研究

纪白慧  
【摘要】:石榴(Punica granatun L.)在我国是一种历史悠久、种植广泛的水果,富含对人类健康有益的生物活性物质。近年来,石榴在保健和药用方面的作用已引起广泛的关注,但主要集中在石榴多酚、黄酮类粗提物方面的研究,未见关于其确切抗氧化成分的报道,在化妆品方面也研究尚浅。本课题选择以石榴果实废弃物—石榴籽、皮为研究对象,分别对其进行提取,研究了石榴籽油的主要成分及其抗氧化作用,并对石榴皮抗氧化性成分的提取、纯化和鉴定进行了系统的研究。在此基础上,采用毛细管电泳法对石榴皮中主要抗氧化成分进行了定性定量分析,并初步探讨了石榴皮提取物在美白、抑菌功能方面的效果。具体研究内容如下: 1、以正己烷为提取溶剂比较了超声波法和回流法对石榴籽油得率的影响,通过GC-MS(气-质联用)分析了石榴籽油的主要成分,并试验了石榴籽油、维生素C和BHT对DPPH、·OH、·O2-体外三种自由基体系的抗氧化作用。结果显示,超声波法提取石榴籽油效率更高;GC-MS检定出石榴籽油主要由8种脂肪酸成分构成,按出峰顺序排列分别为棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、石榴酸、α-桐酸、梓树酸、β-桐酸,其中石榴酸含量最高,达56.03%;抗氧化实验结果表明石榴籽油对DPPH、·OH和·O2-均有抑制作用,同常用抗氧化剂维生素C和BHT相比,石榴籽油比维生素C弱,但与BHT相当。 2、采用超声波法,以DPPH抑制率为指标提取石榴皮中抗氧化成分,通过单因素和正交实验优选得到了提取石榴皮抗氧化成分的最佳工艺参数:乙醇浓度60%、pH3、料液比(m/v)1:15、提取3次,每次40min。将制取的石榴皮粗提物依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、水萃取,经D101大孔吸附树脂纯化,并采用液-质联用法(LC-MS)对石榴皮抗氧化成分进行鉴定。结果表明,石榴皮粗提物中,正丁醇部位对DPPH的抑制率最高,达62.68%,LC-MS(液-质联用)鉴定出安石榴苷的两种异构体为石榴皮中最主要的抗氧化成分。 3、建立了毛细管电泳法(CE)测定石榴皮中安石榴苷和鞣花酸含量的方法,并对不同产地石榴的石榴皮中鞣花酸和安石榴苷的含量进行了测定。研究了运行缓冲液pH和浓度、运行电压等参数对电泳分离的影响,得到最优化的测定条件:50mmol/L的硼砂-硼酸缓冲液(pH8.7),分离电压20kV,电动进样9s/20kV,检测波长260nm。结果显示,鞣花酸和安石榴苷的线性范围为5.0×10-7~5.0×10~(-5)g/mL和2.0×10-6~5.0×10~(-5)g/mL,检出限分别为1.0×10-7g/mL和1.3×10~(-6)g/mL,峰面积的相对标准偏差(RSD)分别为2.4%和2.2%(n=7),平均回收率为101%和98%(n=3)。通过与高效液相色谱法比对,T-检验表明两组数据无显著性差异,显示了方法的准确性。 4、通过体外酪氨酸酶法考察了石榴皮纯化物安石榴苷的美白效果,并分别采用抑菌圈法和最小抑菌浓度法比较了石榴皮粗提物和纯化得到的安石榴苷对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制能力,结果表明石榴皮提取物在防腐和美白方面均具有很好的效果,可作为天然化妆品添加物在化妆品领域进行广泛的应用。


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