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不同比例n-6/n-3多不饱和脂肪酸体外营养评价

王莉梅  
【摘要】:多不饱和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acids,PUFAs)是人体必需的重要营养物质,包括n-6和n-3 PUFAs,它们具有抗氧化、预防心血管疾病、抗炎、降低血液中胆固醇和甘油三酯含量、抑制动脉粥样硬化等生理作用,在人类健康中起重要作用。膳食中n-6与n-3 PUFAs的摄入比例一直备受关注,但目前各国膳食脂肪酸构成比的推荐值却不尽相同,且存在争议,诸多体内和体外实验结果中n-6/n-3 PUFAs最佳比例也并不一致。本课题以Hep G2细胞为研究对象,选取主要存在于植物油中的LA(n-6 PUFAs)和ALA(n-3 PUFAs),参考营养学推荐值,分为七组实验组(组1:LA;组2:10:1 LA/ALA;组3:5:1 LA/ALA;组4:1:1 LA/ALA;组5:1:5 LA/ALA;组6:1:10 LA/ALA;组7:ALA)从抗氧化、炎症及脂质代谢三方面展开体外评估实验,以期为LA/ALA最佳营养比例推荐提供理论依据。具体研究内容如下:首先,研究不同比例LA/ALA对Hep G2细胞抗氧化系统的影响。结果表明:通过MTT实验确定选取60μM不同比例LA/ALA作用Hep G2细胞24 h进行后续实验研究。60μM不同比例LA/ALA可降低Hep G2细胞ROS水平和MDA含量,提高细胞GST和GSH-Px活性,组4(1:1 LA/ALA)作用效果好于其余各组。同时,组4、组5、组6和组7增加GSH含量。然而,各实验组不影响Hep G2细胞的总抗氧化能力。说明60μM不同比例LA/ALA不造成Hep G2细胞氧化损伤,各实验组虽然不影响Hep G2细胞的总抗氧化能力,但能够影响谷胱甘肽系列的抗氧化物含量和抗氧化酶活性。其次,探讨不同比例LA/ALA对Hep G2细胞炎症反应的影响。酶联免疫(ELISA)实验发现60μM各实验组降低Hep G2细胞产生的促炎因子TNF-α和IL-6水平,提高抗炎因子IL-10和抗炎介质LXA4水平,其中组4(1:1 LA/ALA)作用最显著。最后,研究不同比例LA/ALA对Hep G2细胞脂质代谢的影响。结果表明:(1)气相色谱法分析结果显示,向Hep G2细胞添加60μM不同比例LA/ALA能明显改变细胞内脂肪酸组成:组1、组2和组3增加Hep G2细胞内LA和AA的含量;组5、组6和组7增加Hep G2细胞内ALA和EPA的含量;组4(1:1 LA/ALA)增加Hep G2细胞内LA、ALA以及EPA的含量;(2)60μM不同比例LA/ALA显著影响Hep G2细胞的脂质水平:各实验组与Hep G2细胞共同培养后,细胞内TC、TG以及LDL-C水平均显著下降,组4(1:1 LA/ALA)作用最显著,同时组4、组5、组6和组7增加Hep G2细胞HDL-C水平,其余各组不影响;(3)60μM不同比例LA/ALA均显著影响Hep G2细胞载脂蛋白的分泌:ELISA结果显示,不同比例LA/ALA均显著降低Hep G2细胞分泌的Apo B含量,组4(1:1 LA/ALA)作用最显著;组4、组5、组6和组7显著增加Hep G2细胞分泌的Apo A-I含量,其余各组不影响。(4)RT-PCR结果显示,60μM不同比例LA/ALA通过下调Hep G2细胞SREBP-1和FAS基因的表达来降低细胞TG含量,组4(1:1 LA/ALA)作用最显著;通过下调HMG-CR基因的表达,上调LDLr基因的表达来降低细胞总胆固醇和低密度脂蛋白含量,降低胆固醇的合成,组4(1:1 LA/ALA)作用最显著;组4、组5、组6及组7通过上调SR-B1基因的表达增加胆固醇的逆转运,进而降低细胞胆固醇含量。综上所述,60μM不同比例LA/ALA作用Hep G2细胞24h后,对Hep G2细胞均不产生氧化损伤,同时能加强谷胱甘肽系列的抗氧化作用;改善Hep G2细胞炎症;通过影响与脂代谢相关的基因表达来降低Hep G2细胞内脂质水平,LA/ALA最佳作用比例为1:1。


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