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食品中残留克伦特罗酶免疫检测的研究

贺铁明  
【摘要】:食品安全问题已经成为全球关注的焦点问题之一。近十年来,克伦特罗(Clenbuterol CL)残留致使食物中毒的报道屡见报端,严重损害了人们的健康。酶联免疫吸附检测法 (ELISA)和化学发光酶免疫检测法(CLEIA)是两种简便、快速,并非常适合大规模样品筛 选的酶免疫检测方法,但国内检测CL的ELISA试剂盒主要依靠价格昂贵的进口试剂盒, 严重影响了这两种方法的推广。研制自主产权的快速检测 CL 的 ELISA 试剂盒,已成为 监测 CL 非法使用的当务之急。 本论文旨在开发快速检测 CL 的 ELISA 试剂盒。首先,重氮化的 CL 分别与牛血清 白蛋白(bovine serum albumin, BSA)和卵清白蛋白(ovalbumin, OVA)交联,制备成免疫抗 原 CL-BSA 和包被抗原 CL-OVA。免疫原 CL-BSA 按免疫程序免疫新西兰白兔 3 只,5 次免疫后,其中一只兔子产生的抗血清效价高达 3.2×105。此抗血清分别经过饱和硫酸 铵沉淀法、离子交换法和反向免疫亲和层析法纯化后,得到单一特异性的抗体,平均亲 和常数为 4.5×10-9mol/L。以此抗体为基础,设计了间接竞争两步 ELISA(Competitive indirect ELISA ,ic-ELISA)方法,并优化了缓冲液浓度、pH,Tween20 浓度等实验条件。 此 ELISA 试剂盒检测限为 0.096ng/mL,体液(尿液和血液)和组织回收率为 80~120%。 通过重复性、灵敏性、准确性、精确性等指标来评估此检测方法,并与 HPLC 法和德国 r-biopharm 公司的试剂盒进行了比较。结果表明,此间接竞争 ELISA 各项参数均能达到 实际检测的需要。 同时本研究对 CLEIA 法检测 CL 进行了探索性研究,改变 ELISA 检测方法的部分 条件,CLEIA 法的检测限达到 0.01 ng/mL,比 ELISA 法低 10 倍,显示了该检测方法的 优越性。


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