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姬松茸深层发酵富锌工艺的研究

刘坤  
【摘要】:药用真菌是具有保健功效的一类真菌,其发酵液含有多糖、蛋白质等多种具药理活性的物质,已是具有保肝、抗肿瘤、调节免疫等活性的保健食品,为进一步强化其对肿瘤的防治效果,本论文首先以三种药用真菌灵芝、灰树花和姬松茸为载体,比较了几种微量元素对这三种药用真菌深层发酵的影响,以制备高活性的抗肿瘤、调节免疫制剂为目的,根据结果从中选择了适当的载体姬松茸和合适的富集对象锌,重点研究了姬松茸富集微量元素Zn的深层发酵生产,并分离得到了富锌胞内多糖主要成分,并初步探讨其结构。 本文首先对三种药用真菌富集微量元素Zn、Se、Fe的能力进行了初步研究,结果表明,灵芝富锌、铁、硒的最适浓度分别为60μg/mL、120μg/mL、50μg/mL,灰树花富锌、铁、硒的最适浓度分别为30μg/mL、100μg/mL、30μg/mL,姬松茸富锌、铁、硒的最适浓度分别为100 μg/mL、200μg/mL、30μg/mL。并且对锌和铁进行了有机化的分析,灵芝锌的有机化程度为77%,铁的为82%;灰树花锌的有机化程度为60%,铁的为91%;姬松茸锌的有机化程度为55.5%,铁的为82%。 本文比较了这三种药用真菌富集微量元素Zn的特性,并且对三种发酵液进行了动物体内抗肿瘤试验。实验表明三种药用真菌中灰树花的耐锌能力最差耐锌能力只能达到50mg/L,而灵芝和姬松茸的耐锌能力都可以达到300mg/L。灵芝在添加240mg/L锌时较适宜,此时吸收率为30.39%;灰树花添加90mg/L锌较合适,此时锌的富集率为1.66%;对于姬松容其添加量为200mg/L时,富集率最大达11.13%。在三种药用菌中灵芝对于锌的富集能力最强,而灰树花的富集能力最弱,相比较而言灵芝与姬松茸较适合作为富锌的载体。在对小鼠肝癌移植瘤抑瘤活性实验结果表明,三种真菌富锌发酵液对其都有一定的抑瘤作用,其中姬松茸作用最为明显,抑瘤率达到39.3%。 综合上面试验我们选择了姬松茸作为载体来富集微量元素锌,并对其进行了详细的研究。首先优化了富锌发酵姬松茸的各种物理条件:pH5.6、25℃、装液量50ml/250ml、接种量15%;然后比较了富锌培养和不富锌培养的生长曲线:添加锌后菌丝干重比对照明显提高,最大值在132h,为对照组的1.44倍,但延长了发酵周期;发酵终点残糖较低,富锌的为0.91g/L,而对照组为1.25g/L;最后对复合添加进行了正交试验得到了最适复合添加方案:加锌量200μg/mL、加硒量10μg/mL、加铁量200μg/mL;并在最适的复合添加方案下比较了不富集、富锌、复合添加的发酵试验:比较其各自的发酵指标发现添加微量元素可以促进姬松茸的生长,同时发现复合添加时其胞内多糖和生物量明显比不富集和富锌的有所增加,但是其胞外多糖的含量较富锌时有所下降。 最后通过分离纯化得到了一个主要的胞内纯多糖组分AbMP_(Zn)-1-A,并对其进行了


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