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红车轴草异黄酮的分离、纯化、结构鉴定及生理功能研究

陈寒青  
【摘要】:本文以红车轴草为研究对象,主要研究内容包括:红车轴草全草及不同部位中蛋白质、氨基酸、异黄酮含量的测定;红车轴草异黄酮的种类;红车轴草异黄酮的定量方法;红车轴草异黄酮的提取工艺及树脂的筛选;红车轴草异黄酮单体的分离、纯化及结构鉴定;红车轴草异黄酮在帕金森病炎性细胞模型中的应用研究;红车轴草异黄酮不同添加形式及水平对产蛋后期蛋鸡生产性能及生理生化指标的影响。 对红车轴草全草及不同部位(花、茎、叶)中蛋白质和氨基酸的含量进行了测定,结果表明,红车轴草中粗蛋白含量较高,全草中含量为16.66%,不同部位以叶中含量最高(21.57%),花次之(18.46%),茎中含量较低,只有8.87%。红车轴草全草中氨基酸总量为11.00%,不同部位中氨基酸总量差异较大,叶中含量最高,为17.73%,花次之,为13.71%,而茎中含量较低,只有6.44%。另外,叶中Asp、Glu、Leu、Val、Ala、Phe、Lys和Gly等8种氨基酸含量相对较高,分别为2.31%、2.18%、1.66%、1.25%、1.13%、1.10%、1.04%和1.03%。 通过高效液相色谱法对红车轴草全草及不同部位(花、茎、叶)中四种异黄酮(biochanin A,formononetin,genistein,daidzein)的含量进行了测定,结果表明,以占干物质计,4种异黄酮总量,全草为0.531%,不同部位以叶中含量最高(0.856%),茎次之(0.403%),花中含量较低(0.258%)。鸡豆黄素A和芒柄花素是红车轴草中两种最主要的异黄酮,主要分布在叶中,其次是茎,花中含量较低。染料木素和大豆黄素,无论是花、茎还是叶,含量均较低。 通过高效液相色谱法及紫外光谱技术,对红车轴草中异黄酮的种类进行了分析,结果表明,红车轴草中异黄酮约有20种左右。 根据异黄酮的光谱特性,首次建立了红车轴草异黄酮的简易定量方法――三波长紫外分光光度法,该法测定红车轴草乙醇提取液中异黄酮含量时,能有效地消除色素和醇溶性蛋白等干扰物质对测定结果的影响。该方法具有简便、快速、准确等特点,适合于红车轴草异黄酮提取分离工艺探讨中多次快速检测异黄酮含量。 通过单因素实验和正交实验,确定了红车轴草异黄酮的乙醇提取工艺参数:乙醇浓度80%,温度80℃,料液比1∶15,每次提取时间1h,提取3次,红车轴草异黄酮的提取率可达91.90%。 通过对14种大孔吸附树脂静态吸附特性的研究,确定了AB-8树脂是一种理想的红车轴草异黄酮的吸附剂,该树脂对红车轴草异黄酮不仅吸附量大,而且解吸率高,适合红车轴草异黄酮的分离富集。通过对AB-8树脂的动态吸附特性研究,确定了红车轴草异黄酮提取液合适的上柱液浓度为0.79-1.11mg/mL,上柱液pH为4.24,上柱液流速为2BV/h。用4倍树脂柱床体积的80%乙醇以2BV/h流速进行洗脱,可基本上将异黄酮从树脂上解吸下来,并且洗脱峰集中、对称,无明显拖尾现象,异黄酮回收率为93.72%。


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