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黄精降血糖活性成分的提取、分离及结构鉴定

齐斌  
【摘要】:黄精(Rhizoma polygonati)为百合科(Liliaceae)黄精属(Polygonatum Mill.)多年生草本植物。黄精含有多种对人体有益的化学成分,如多糖、甾体皂苷、蒽醌类、生物碱、强心苷、木脂素、维生素和氨基酸等。 本文对黄精的化学成分进行了系统的研究;进行了黄精皂苷及其苷元的分离、纯化及结构鉴定;确立黄精总皂苷的提取工艺,并筛选出适合分离纯化黄精总皂苷的大孔吸附树脂型号;建立了黄精总皂苷的ELISA的检测方法;并对黄精提取物降血糖活性进行了研究。 通过气相色谱-质谱联用技术,对黄精中的脂肪酸、挥发性成分进行了测定,结果表明:黄精中的脂肪酸主要是亚油酸、棕榈油酸、硬脂酸、亚麻酸、花生酸,其相对质量分数分别是38.79%、33.20%、10.45%、9.74%、2.73%。黄精挥发性成分的组成较复杂,有羧酸类、醛类、醇类、芳香类、烷烃类、酸酐等多类别的化合物,其中主要有己醛、己烯酸、正己醇,相对质量分数分别为:29.13%、14.7%、4.89%。黄精所含的氨基酸种类齐全,氨基酸总量为5.778 g/100g,必需氨基酸总含量为1.075g/100g。 通过与标准品对照及利用NMR等手段确定了从黄精中提纯的皂苷元为薯蓣皂苷元。 通过琥珀酸酐法进行了半抗原的改造,碳二亚胺法进行了半抗原和大分子蛋白的偶联,成功地合成了免疫原和包被原。半抗原和牛血清白蛋白及卵清蛋白的结合比分别是21:1和11:1。利用合成的免疫原免疫新西兰大白兔,获得效价为1:12800的多克隆抗体。方阵滴定法确定抗体的最佳稀释度为1:3000;包被原的最佳稀释度为1:10000,包被原工作浓度为1.25μg/mL。 首次利用所制备的兔抗薯蓣皂苷多克隆抗体建立检测黄精皂苷的ELISA方法。其标准曲线在5.105×10~(-3)~3.972×10~(-1)μg/ml线性范围内呈相关性,回归方程I=32.021LogC+189.02,相关系数R~2=0.9974。最低检测下限I10为2.468×10~(-3)μg/ ml。并进行了ELISA分析条件的优化。ELISA检测方法测定黄精皂苷的结果表明:批内误差和批间误差的变异系数皆小于10%;样品的回收率在80.33~103.88%之间,变异系数﹤3%。与人参皂苷和强心甙的交叉反应率分别为3.24%和7.68%,对黄精总皂苷的特异性较高。通过ELISA方法,测得黄精中总皂苷含量为0.1366%(以薯蓣皂苷记)。 通过正交实验,确定了黄精总皂苷提取最优工艺参数为:提取温度80oC、乙醇浓度80%、提取时间180min、料液比1:20。 通过对8种大孔吸附树脂静态吸附特性的研究,确定了LSA-30大孔吸附树脂是一种黄精总皂苷理想的吸附剂。通过进一步对LSA-30型树脂的动态吸附特性的研究,LSA-30型树脂在上样液浓度0.5~0.85mg/ml,洗脱剂流速3ml/min时,对黄精总皂苷


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