收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

马尾松CAD和CCoAOMT基因的克隆与表达分析

张逢凯  
【摘要】:CAD和CCoAOMT都是木质素生物合成中所需的酶,已证实在木质素单体的合成中发挥重要的作用。马尾松是我国南方的重要用材树种,但至今未见关于其CAD和CCoAOMT的研究报道。本文研究了马尾松中的两基因,结果如下: 1、本研究利用CODEHOP设计简并引物,采用RT-PCR和RACE技术,从马尾松茎中克隆出CAD和CCoAOMT的cDNA全长,GenBank登入号分别为:KF419291和KF419292。PmCAD的cDNA全长1450bp,包括1074bp完整的ORF,编码357个氨基酸的蛋白,所编码蛋白质的分子质量与等电点分别为38945.1u和5.8;PmCCoAOMT的cDNA全长1126bp,包括780bp完整的ORF,编码259个氨基酸的蛋白,所编码蛋白质的分子质量与等电点分别为29068.3u和5.12。利用MEGA5.0、DNAMAN、ANTHEPROT等软件分析核苷酸序列及其编码的氨基酸序列。组织特异性分析结果,马尾松CAD和CCoAOMT在嫩枝、根、叶和新芽中有不同程度的表达,其中在嫩枝中的表达丰度最高,在根和叶中次之,在新芽中的表达丰度最低。 2、PmCAD和PmCCoAOMT植物反义表达载体的构建以及在转基因植物中的表达。PmCAD和PmCCoAOMT分别反向插入表达载体pBI121中,采用液氮冻融法将载体导入农杆菌EHA105中,用烟草叶盘做外植体材料将构建的反义表达载体转入烟草中,Klason法测定植株中的木质素含量,测定结果表明,将PmCAD基因反向转入的烟草相对于野生型烟草中平均木质素含量降低较少,将PmCCoAOMT基因反向转入的烟草相对于野生型烟草中平均木质素的含量降低了6.6%,两种转基因植物长势没有太大区别。 3、PmCAD基因的原核表达载体的分析。成功构建了PmCAD基因的原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,并对原核表达载体的外源诱导条件进行优化分析。诱导表达优化结果说明马尾松CAD在pH为7,温度为37℃,IPTG为6.0时诱导3h较好。并测得PmCAD基因在外源诱导表达的蛋白质分子质量约为39KDa。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 陈建荣;张学文;郭清泉;;分离克隆苎麻CCoAOMT基因部分序列[J];作物学报;2006年05期
2 陈建荣;郭清泉;张学文;;苎麻CCoAOMT基因全长cDNA克隆与序列分析[J];中国农业科学;2006年05期
3 邓晶;刘峰;郭清泉;陈建荣;张学文;;苎麻CCoAOMT基因干扰表达载体构建及对烟草的转化[J];湖南农业大学学报(自然科学版);2008年02期
4 洪艳云;黄志刚;易图永;;南荻CCoAOMT基因的克隆与生物信息学分析[J];中南林业科技大学学报;2011年10期
5 ;[J];;年期
6 ;[J];;年期
7 ;[J];;年期
8 ;[J];;年期
9 ;[J];;年期
10 ;[J];;年期
11 ;[J];;年期
12 ;[J];;年期
13 ;[J];;年期
14 ;[J];;年期
15 ;[J];;年期
16 ;[J];;年期
17 ;[J];;年期
18 ;[J];;年期
19 ;[J];;年期
20 ;[J];;年期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 陈建荣;苎麻木质素合成关键酶CCoAOMT基因分离及遗传转化的研究[D];湖南农业大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 陈肃;白桦4CL与CCoAOMT基因表达分析及蛋白预测[D];东北林业大学;2009年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978