马尾松组织培养的研究

【摘要】： 以广东信宜、广西桐棉马尾松(Pinus massoniana Lamb．)优良种源成熟合子胚为起始外植体，研究了马尾松在组织培养条件下，不定芽的诱导、分化、伸长及生根。结果表明：不定芽诱导分化的最佳培养基为DCR+0.5mg／L 6-BA+0.05mg／L NAA，分化频率可达100％；接种3-4周后将已形成不定芽原基的合子胚转入不定芽分化培养基中，2周后可分化出大量不定芽丛；之后继代于不添加任何激素的GD基本培养基中，芽伸长效果较好；生根培养基为1／2GD+2mg／L IBA+0.05mg／L BA，生根率达78.8％。不定芽一般在生根培养基中培养4-6周后可形成根，在根长达1-2cm时打开培养瓶封口膜炼苗3-5天后即可进行移栽。 研究观察表明，以马尾松成熟合子胚为外植体，诱导的不定芽原基形成一般发生在萌发的子叶或靠近子叶的上胚轴处。培养基中配合使用生长素较单一使用细胞分裂素的诱导效果更为理想，且BA与NAA组合效果略好于BA与IBA的组合，生长素(NAA，IBA)浓度在0.05-0.1mg／L之间为宜。实验证明，不定芽原基的诱导完成后，及时转入降低激素浓度的分化培养基中，是分化产生大量高质量不定芽的必要条件。 本研究还以马尾松成熟合子胚育出的无菌小苗为外植体建立针叶基潜伏芽的诱导增殖和试管无性系。马尾松无菌小苗针叶束基部潜伏芽诱导中细胞分裂素的作用效果以KT为佳。最佳诱导培养基为DCR或GD+KT1mg／L+IBA0.2mg／L，潜伏芽分化率分别为95.7和94.5％。经伸长培养后小苗的诱导生根与移栽同诱导不定芽分化生根过程类似。 体细胞胚胎发生研究中，诱导马尾松合子胚脱分化形成白色粘性愈伤比较容易，且一定激素浓度范围之内的培养基之间并无明显差别。而在以后的生长和保持过程中，2,4-D浓度偏低的组合愈伤组织相对生长状态较好且保持时间较长，而且1＜生长素：细胞分裂素＜3的组合对愈伤组织的保持和增殖比较合适。所以笔者认为在马尾松成熟合子胚胚性愈伤组织的诱导及保持中，生长素(2,4-D、NAA)的浓度在0.5-2mg／L之间，且将生长素与细胞分裂素(BA、KT)配合的比例保持在1-3之间效果较好。如何促进胚性愈伤组织的分化及体细胞胚的萌发有待于进一步的深入研究。 上述研究为马尾松优良无性系的快速繁殖、以及发展马尾松的体细胞胚胎发生诱导技术，进而开展遗传转化研究奠定了良好的基础。