收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

鸡腿菇(Coprinus comatus)漆酶的诱导及cDNA克隆

卢翔  
【摘要】: 漆酶是一种铜多酚氧化酶,主要存在于白腐菌中,是一种分泌至胞外的糖蛋白。漆酶可以降解木质素和氧化酚类、芳胺类化合物,有着广泛的用途。鸡腿菇是一种能高效分泌漆酶的白腐菌。 本论文首先研究了鸡腿菇在25℃、四种不同培养基中进行液体静置培养时,漆酶活力的比较。研究表明A培养基(碳源为葡萄糖,氮源为酵母浸膏)的鸡腿菇漆酶活性最高。后续实验研究了不同的金属离子和芳香族化合物对漆酶产酶的影响。结果显示添加浓度为0.8mmol/L的锰离子和3.0mmol/L的咖啡酸对鸡腿菇漆酶的诱导作用最明显。其它的化学试剂分别在不同的浓度表现出诱导作用。其中在低浓度表现出最佳诱导作用的是4-甲氧基肉桂酸、茴香酸、3,4,5-三甲氧基肉桂酸、愈创木酚、3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸、香兰素、3-(4-甲氧苯基)-丙酸。而Cu~(2+)、3,4-二甲氧基苯甲醛、肉桂酸、4-羟基肉桂酸、3-(4-羟基苯基)-丙酸则在高浓度时诱导效果最好。对碳源和氮源的研究表明最佳碳源是葡萄糖,最佳氮源是蛋白胨。通过不连续聚丙酰烯酰胺凝胶电泳分析发现,不同种类、浓度的化学试剂会诱导产生不同的鸡腿菇漆酶的同工酶,由于这些同工酶具有不同的等电点所以电泳中表现出不同的谱带。漆酶最适反应pH值和温度为6.0和60℃。 本论文实验还从鸡腿菇中提取mRNA,反转录得到cDNA序列,再根据真菌漆酶蛋白质家族的保守氨基酸结构域设计一系列简并性引物,进行PCR扩增得到143bp的鸡腿菇漆酶特异性基因片段。再利用BLAST程序将该序列与NCBI数据库中的漆酶基因进行比对,证明与其它漆酶基因高度同源。再通过RACE(cDNA末端快速扩增技术)得到鸡腿菇漆酶5’端的cDNA序列,共626bp。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 周海胜,田方,肖凤君,张立新,李克勤;TRAIL胞外段基因克隆及其表达与纯化[J];中国免疫学杂志;2002年07期
2 郭芝光;尉亚辉;刘蕾;张儒;朱剑光;;白藜芦醇合酶基因的克隆及对毕赤酵母的转化[J];西北大学学报(自然科学版);2006年02期
3 康传红;王淑春;陈胜勇;李彩凤;;甜菜胞质型谷氨酰胺合成酶基因组DNA的克隆[J];植物生理学通讯;2008年04期
4 晏利波;陈菁菁;官春云;;抑制消减杂交技术在植物基因克隆研究中的应用[J];作物研究;2008年S1期
5 吴陈璐;赵水平;于碧莲;熊丹;;重组Trx-ApoO融合蛋白的构建与表达(英文)[J];中南大学学报(医学版);2011年02期
6 黄培堂;W.K.Maas;;表达具有热稳定肠毒素Ⅱ免疫原性融合蛋白菌株的构建[J];生物工程学报;1988年04期
7 温晋;周天鸿;郑兆鑫;严维耀;;棒状杆菌亮氨酸操縱子在大肠杆菌中的克隆和表达[J];暨南大学学报;1989年01期
8 庄楚雄;张秋福;钟文彪;黄自然;;柞蚕核多角体病毒基因工程载体的研究——Ⅱ.柞蚕核多角体病毒多角体蛋白基因的克隆、定位及部份DNA的序列分析[J];广东蚕业;1990年01期
9 王璋瑜;;癌症夺走第四名巴斯德所基因克隆研究人员[J];生物技术通报;1990年01期
10 周桢林;陈琦;;假单胞菌质粒抗汞基因的克隆[J];中山大学学报(自然科学版);1990年03期
11 罗进贤;刘展雄;李文清;;短小芽孢杆菌β-内酰胺酶基因的克隆[J];中山大学学报论丛;1990年02期
12 朱棣;刘延清;金奇;刘汉明;;霍乱肠毒素基因克隆及A2-B亚单位基因核苷酸序列分析[J];生物工程学报;1990年02期
13 张兰芳;李忠伟;张其玖;;巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶基因的克隆和表达[J];生物工程学报;1991年01期
14 蔡仕英,姚志建,刘亚霞,强伯勤;金黄色葡萄球菌A蛋白基因的克隆及序列分析[J];中国生物化学与分子生物学报;1992年03期
15 邓小昭,张林元,何亮,张志敏;乙肝病毒e抗原基因在大肠杆茵中高表达[J];中国药科大学学报;1992年05期
16 郑建强;王建安;马宏进;白炎;沈倍奋;;可溶性 CD8α链基因克隆及序列分析[J];中国免疫学杂志;1992年04期
17 王义良;罗进贤;胡晋新;李文清;;地衣芽胞杆菌α-淀粉酶基因的克隆及其表达[J];中山大学学报论丛;1992年03期
18 王杨;张志毅;杨胜利;吴汝平;;par区域的克隆及其对质粒pUC9稳定性的影响[J];生物工程学报;1992年02期
19 张林元,邓小昭,何亮,张志敏;乙肝病毒核心抗原基因在大肠杆菌中的高表达[J];中国药科大学学报;1993年01期
20 沈法富,尹承佾;植物基因克隆的方法和策略[J];大自然探索;1997年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 孙峥;许雷;;产漆酶细菌菌株的分离及基因克隆[A];中国生物化学与分子生物学会农业生物化学与分子生物学分会第八次学术研讨会论文集[C];2008年
2 王建华;吴建平;费春红;杨联;张利平;;牦牛钙激活蛋白酶抑制蛋白CAST基因克隆及其测序分析[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
3 孙玲;余少波;刘榜;;猪Nudt6基因克隆以及与眼肌面积性状相关SNP发现[A];第十二次全国畜禽遗传标记研讨会论文集[C];2010年
4 戴佳琳;吴璇;黄江;杜武英;胡旭初;徐劲;余新炳;;亚洲牛带绦虫肌动相关蛋白2/3复合体亚单位4基因的克隆、表达及免疫反应性鉴定[A];全国寄生虫学与热带医学学术研讨会论文集[C];2008年
5 朱炎平;邱君志;关雄;;粉虱座壳孢(Aschersonia aleyrodis)几丁质酶基因克隆的研究[A];中国农业生物技术学会第三届会员代表大会暨学术交流会论文摘要集[C];2006年
6 吕海鹏;史俊南;赵守亮;Athony J.Smith;;人成牙本质细胞样细胞L型钙离子通道α_1亚基D亚型特异性基因的表达、纯化和多克隆抗体的制备[A];2007年第七次全国牙体牙髓病学学术会议论文集[C];2007年
7 王玮;杜艳;林国强;孙秉中;;RNA干涉bcr abl融合基因联合P27基因克隆对K562细胞的影响[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
8 方卫国;肖月华;冷波;杨星勇;张永军;裴炎;;一种新的球孢白僵菌几丁酶Bbchit1的纯化和基因克隆[A];首届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文摘要集[C];2002年
9 张志春;张谷丰;罗光华;方继朝;;小菜蛾嗅觉膜原蛋白SNMP1基因的克隆表达[A];植保科技创新与病虫防控专业化——中国植物保护学会2011年学术年会论文集[C];2011年
10 王翠;李世军;李闯;俸艳萍;彭秀丽;龚炎长;;鸭多巴胺受体1(DRD1)基因克隆与多态性检测[A];安全优质的家禽生产——第十五次全国家禽学术讨论会论文集[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李志勇;调控玉米大斑病菌生长发育和致病性的CaM基因的克隆与功能分析[D];河北农业大学;2008年
2 谢科;水稻WRKY10基因的功能研究[D];浙江大学;2005年
3 邢继红;拟南芥抗灰葡萄孢相关基因的克隆和功能分析[D];河北农业大学;2006年
4 魏继承;白桦花期抑制性消减文库的构建及花发育相关基因的克隆[D];东北林业大学;2006年
5 赵明莲;食线虫真菌侵染性胞外蛋白酶的基因克隆与表达[D];云南大学;2003年
6 郭虹;弓形虫侵入相关分子ROP1基因的克隆及其DNA免疫研究[D];中山医科大学;1999年
7 王昕;巨噬细胞集落刺激因子可溶性受体的克隆表达及其相关性研究[D];中国协和医科大学;1998年
8 李伟;圆锥小麦地方品种遗传多样性研究[D];四川农业大学;2006年
9 段冷昕;梅花鹿茸多肽的化学结构及其抗肝纤维化作用[D];吉林大学;2007年
10 倪多娇;栉孔扇贝抗氧化酶基因的克隆与表达分析[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 卢翔;鸡腿菇(Coprinus comatus)漆酶的诱导及cDNA克隆[D];南京林业大学;2006年
2 姜曼;鸡腿菇漆酶诱导、对染料脱色及基因克隆研究[D];南京林业大学;2011年
3 贺立燕;杂色云芝漆酶同工酶基因的克隆及高效表达[D];南京林业大学;2011年
4 马文寅;Pycnoporus sanguineus SYBC-L1漆酶酶学性质、基因克隆及结构分析研究[D];江南大学;2012年
5 鲍鸣;鸡IFN-γ基因的克隆与原核表达[D];安徽农业大学;2005年
6 刘占通;猪α干扰素基因克隆、原核表达及抗病毒活性研究[D];河南农业大学;2005年
7 张怡;重组鼠抗人CD19单链抗体的构建和表达[D];浙江大学;2006年
8 郝敏;玉米与大斑病菌构成的不同互作中基因表达的研究[D];河北农业大学;2006年
9 黄志强;产碱性蛋白酶海洋细菌的筛选及其基因克隆[D];福建农林大学;2006年
10 武鸿;嗜热脂肪地芽孢杆菌脂肪酶基因的克隆、表达及酶学性质研究[D];浙江大学;2007年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 肖辉;出口鸡腿菇的保鲜[N];河南科技报;2000年
2 姚彦波;温室黄瓜套种鸡腿菇增收模式[N];瓜果蔬菜报.农业信息周刊;2005年
3 ;鸡腿菇的栽培技术[N];吉林农村报;2005年
4 沧州市献县县委宣传部 左大中 韩非;献县:林地巧种鸡腿菇[N];河北农民报;2006年
5 山东省农科院土肥所 曹德宾 刘英 王艳芹;鸡腿菇的市场定位及生产效益[N];山东科技报;2007年
6 良晨;鸡腿菇的保鲜[N];山东科技报;2005年
7 李大志;鸡腿菇保鲜技术[N];山西科技报;2005年
8 山东省农科院土肥所 曹德宾;草菇、鸡腿菇市场升温[N];江苏农业科技报;2007年
9 郑巧云;鸡腿菇炒莴笋[N];沈阳日报;2008年
10 姚彦波;温室黄瓜与鸡腿菇套种技术[N];科学导报;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978