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优良杀虫绿僵菌菌株的筛选及其培养研究

潘永胜  
【摘要】: 绿僵菌是世界上最早大量生产并用于田间防治的昆虫病原真菌之一。自1878年俄国人Metschnikoff用金龟子绿僵菌防治奥地利金龟子和甜菜象甲以来已有百余年的历史,尤其在剂型的改进和防治对象的扩大上取得了较大的进展。但是与Bt等微生物杀虫剂的研究相比还有很大的差距,因此还需加强绿僵菌的研究与应用。 本研究收集了21个绿僵菌菌株,对它们进行了基本的生物学性状测定。以产孢量为主要指标,筛选出了产孢量高的四个菌株。然后通过室内生测研究了四菌株对几种靶虫的致病力,筛选出致病力最强的菌株Ma_(789)。另外,还对管氏肿腿蜂携带Ma_(789)室内防治松褐天牛幼虫进行了研究,并进一步研究了Ma_(789)的液体振荡和固体平板培养条件,得出结果如下: 1、通过对21株绿僵菌的基本生物学性状测定可知,它们在菌落生长速度、产孢起始时间、产孢量、孢子耐热性等方面都有不同程度的差异。其中产孢量最高菌株的产孢量是最低菌株的40多倍,产孢量高的四菌株孢子耐热性也有所差异。通过不同温度水浴处理后测定孢子萌发力表明,Ma_(788)孢子表现较强的耐热性,Ma_1、Ma_(42)孢子耐热性适中,Ma_(789)孢子耐热性差。 2、Ma_(42)、Ma_(788)、Ma_(789)三菌株直接浸渍法对松褐天牛成虫进行了室内生测,结果为Ma_(789)毒力最强,其次是Ma_(788),而Ma_(42)毒力相对较弱;Ma_1、Ma_(42)、Ma_(788)、Ma_(789)四菌株食物污染法对杨扇舟蛾幼虫室内生测结果表明四菌株毒力强弱为Ma_(789)>Ma_(788)>Ma_1>Ma_(42);对影等鳃金龟幼虫生测结果也表明Ma_(42)、Ma_(788)、Ma_(789)三菌株中毒力最强的仍然是Ma_(789)。 3、通过Ma_1、Ma_(42)、Ma_(788)、Ma_(789)、B_(福建)五菌株室内感染松褐天牛幼虫筛选出毒力相对较强菌株Ma_(789),然后进一步研究了其1.0×10~5~1.0×10~8个/mL不同孢子浓度梯度对松褐天牛幼虫的毒力,结果显示其对松褐天牛幼虫的半致死浓度为2.9×10~5个/mL;而管氏肿腿蜂对松褐天牛幼虫室内寄生试验显示随着接蜂量的增加,管氏肿腿蜂对幼虫的寄生死亡率是不断提高的,当虫蜂比提高到1:4~1:5时,管氏肿腿蜂对松褐天牛幼虫的平均校正死亡率达96.7%;每只管氏肿腿蜂携带Ma_(789)约1.0×10~7个孢子/mL时,对老熟松褐天牛幼虫按虫蜂比1:1、1:2和1:3接蜂,寄生感染死亡率分别为56.667%、70%和100%。 4、通过对Ma_(789)液体振荡培养及正交试验法,筛选出了Ma_(789)的最佳液体振荡培养基配方,其中液体振荡培养Ma_(789)菌丝体的最优配方为蔗糖2.0%,酵母粉1.0%,KH_2PO_40.3%,MgSO_4·7H_2O0.1%,CaCl_20.05%:液体振荡培养Ma_(789)产孢的最佳液体培养基配方为蔗糖2.0%、蛋白胨1.0%、KH_2PO_40.15%,MgSO_4·7H_2O0.2%,CaCl_20.05%。另外,通过平板培养法,进一步探明了不同碳源对Ma_(789)菌丝生长和产孢量的影响。


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