收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

两种组分的纤维素酶基因随机突变及紫外诱变

宗雅冬  
【摘要】: 为了进一步提高基因重组菌的β-葡萄糖苷酶和内切葡聚糖酶的分泌表达能力,以及为这两种酶的深入研究和开发利用提供技术指导,论文探索了β-葡萄糖苷酶和内切葡聚糖酶基因的定向进化及其基因工程菌诱变育种的可行性和方法,主要结果如下: (1)采用易错PCR技术对本实验室已克隆出的β-葡萄糖苷酶基因进行随机突变,将突变后构建的重组质粒pTRC99A-bgl1导入E.coli BL21 CodonPlus(DE3)-RIL中进行表达,结果表明,β-葡萄糖苷酶基因未能实现分泌性表达,而是形成了包涵体。 (2)对酵母基因工程菌GS115-bgl1-38进行紫外诱变育种。筛选出的酵母突变株GS115-bgl1-9和GS115-bgl1-37的酶活分别为出发菌株GS115-bgl1-38产β-葡萄糖苷酶酶活的2倍和1.5倍。通过十次传代实验证明其遗传性能相对稳定。通过对GS115-bgl1-38、GS115-bgl1-9和GS115-bgl1-37的酶学性质比较可知,突变株的最适温度与出发菌株变化不大,但最适pH范围呈扩大趋势,受金属离子的影响与出发菌株差异也较大。 (3)采用单因素和正交实验对酵母突变株GS115-bgl1-9分泌表达β-葡萄糖苷酶的条件进行了初步研究,适宜的条件为:接种量为4%(v/v),每24h添加0.5%(v/v)甲醇,Tween80添加量为0.2%(v/v),L-组氨酸添加量为0.5%(v/v),发酵液初始pH为5.0。 (4)以内切葡聚糖酶基因为模板进行易错PCR,向内切葡聚糖酶引入突变位点,然后将PCR产物连接到载体pTRC99A上构建突变后的表达质粒pTRC99A-Cel5A,导入E.coli BL21 CodonPlus(DE3)-RIL中表达。获得透明圈明显小于未突变菌株的4个菌株pTRC99A-Cel5A-1、pTRC99A-Cel5A-2、pTRC99A-Cel5A-3和pTRC99A-Cel5A-4。4个菌株的诱导产酶实验结果表明,它们的总酶活分别为0.050 IU/mL、0.050 IU/ mL、0.048 IU/ mL、0.043 IU/ mL,均低于未突变株的表达量。但4个突变菌株的酶最适pH和最适温度有一定程度的改变。测序结果表明,突变后的Cel5A基因中少数碱基发生了改变,突变株酶学性质的改变可能就是由于这些碱基的改变所致。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 徐勤;王昌禄;李风娟;王玉荣;陈勉华;;原生质体紫外诱变选育γ-癸内酯高产菌株[J];生物技术通报;2010年05期
2 金雨华;张鹭;;溶源性乳酸菌紫外诱变前后生长特性的初步研究[J];长春大学学报;2008年10期
3 张琪;杨华;朱德育;李武德;周桂香;;利用原生质体融合技术筛选红霉素优良菌株[J];河南科学;2009年07期
4 车黎猛;任发政;陈尚武;;抗后酸化保加利亚乳杆菌的紫外诱变选育[J];食品科学;2006年06期
5 赵琼;杨谦;;细菌纤维素高产菌株的紫外诱变育种研究[J];食品与发酵工业;2007年07期
6 杨玉红;于雪骊;刘长江;;紫外诱变选育多聚赖氨酸高产菌株的研究[J];北方园艺;2007年09期
7 吕红线;林建群;林建强;;L-乳酸高产菌株的诱变选育[J];中国酿造;2008年08期
8 王海波;马霞;王腾飞;任尚美;关凤梅;;细菌纤维素耐低温生产菌株的诱变选育[J];中国酿造;2008年17期
9 郭建军;李建科;陈琳;王淑琴;陈德龙;赵燕;;韦兰胶生产菌的选育[J];食品工业科技;2009年02期
10 罗杰;张云开;朱婧;石君连;陈桂光;梁智群;;原生质体诱变选育β-葡聚糖酶高产菌株[J];食品科技;2010年05期
11 肖钢;邱鑫;丁邦琴;;一株谷氨酰胺合成酶高产菌株的酶学分析及其基因的克隆分析[J];湖北大学学报(自然科学版);2010年03期
12 李秀珍;薄泉;杨平平;王燕;;利用原生质体诱变筛选植酸酶高产菌株[J];饲料工业;2007年08期
13 谭珍连;梁静娟;庞宗文;覃晓娟;;原生质体紫外诱变选育白地霉GXU08脂肪酶高产菌株[J];生物技术;2007年02期
14 晋青波;张庆庆;汤斌;危勤涛;;紫外诱变原生质体提高脂肪酶活力[J];安徽工程科技学院学报(自然科学版);2008年01期
15 张庆庆;晋青波;危勤涛;;原生质体紫外诱变脂肪酶高产菌株[J];食品工业科技;2008年04期
16 李荷迪;金志华;张海光;金花;;纳他霉素产生菌原生质体的制备、再生及紫外诱变[J];工业微生物;2008年03期
17 阳飞;张华山;李荣斌;顾亚婧;;原生质体紫外诱变选育多糖高产菌株[J];中国酿造;2008年22期
18 刘晓媛;郭红莲;杨振;胡明;;果实生防酵母菌株的紫外诱变选育[J];北方园艺;2009年03期
19 孙子羽;迟乃玉;李兵;王宇;张庆芳;;生淀粉糖化酶高产菌株诱变选育[J];大连大学学报;2010年06期
20 侯旭;闵伟红;赵君;方丽;;一株虾青素产生菌的筛选诱变及初步鉴定[J];食品科学;2011年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张爱文;刘维真;农向群;邓春生;;白僵菌菌株的自然筛选及紫外诱变[A];全国生物防治学术讨论会论文集[C];1991年
2 罗建中;刘鸿;康新宇;陈少红;刘玉红;齐水冰;操洲杏;;紫外诱变优势混合菌处理含氯废水的研究[A];中国环境保护产业发展战略论坛论文集[C];2000年
3 周丹;刘世玲;熊巧玲;边银丙;;原生质体紫外诱变选育富硒金针菇菌株[A];首届全国食用菌中青年专家学术交流会论文集[C];2006年
4 吕聪;马玖彤;刘懿;张凤君;;紫外诱变选育低亚硝酸盐积累的好氧反硝化菌株[A];2008中国环境科学学会学术年会优秀论文集(下卷)[C];2008年
5 黄妙容;刘德武;吴珍芳;;福寿螺多功能纤维素酶基因egx的克隆及其体外功能表达[A];中国畜牧兽医学会养猪学分会第五次全国会员代表大会暨养猪业创新发展论坛论文集[C];2010年
6 宫立晶;全艳玲;;虫草菌种选育及发酵工艺优化研究[A];中国菌物学会2009学术年会论文摘要集[C];2009年
7 王玉娟;王军;余增亮;;枯草芽孢杆菌JA18内切葡聚糖酶催化域的圆二色和荧光光谱研究[A];第十一次中国生物物理学术大会暨第九届全国会员代表大会摘要集[C];2009年
8 余祖华;丁轲;程相朝;闫文朝;赵战勤;王臣;张春杰;王天奇;;高产蛋白酶芽胞杆菌的诱变选育和酶学性质研究[A];第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集(上册)[C];2010年
9 刘海英;舒正玉;吴松刚;黄建忠;;长梗木霉内切葡聚糖酶基因的克隆与表达研究[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2009年学术交流会论文摘要汇编[C];2009年
10 王凤超;陈冠军;刘巍峰;;环境基因组文库的构建及纤维素酶基因的筛选[A];2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 龙海波;小麦禾谷孢囊线虫β-1,4-内切葡聚糖酶和细胞壁扩展蛋白基因的克隆及功能分析[D];中国农业科学院;2012年
2 周烈;耐热、高活性杂合内切葡聚糖酶基因的设计、表达及酶学性质研究[D];浙江大学;2010年
3 李旺;纤维素酶基因重组野生型乳酸杆菌表达系统的构建[D];西北农林科技大学;2010年
4 黄乾明;漆酶高产菌株的诱变选育及其酶的分离纯化、性质和基因克隆研究[D];四川农业大学;2006年
5 王秀娟;嗜热真菌纤维二糖水解酶(CBHⅠ、CBHⅡ)和内切葡聚糖酶(EGⅠ)的分子改造[D];山东农业大学;2011年
6 郑凯;斜卧青霉基因表达谱的差异分析研究[D];山东大学;2009年
7 李兴华;纤维素酶产生菌的筛选及纤维素酶基因在家蚕中的表达研究[D];浙江大学;2011年
8 李亚玲;嗜热真菌热稳定纤维素酶的分离纯化及基因的克隆与表达[D];山东农业大学;2007年
9 张亚波;嗜热真菌热稳定纤维素酶的分子改造[D];山东农业大学;2009年
10 林凌;产纤维素酶菌株的筛选和枯草芽胞杆菌内切葡聚糖酶催化活性的改造[D];华中农业大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 宗雅冬;两种组分的纤维素酶基因随机突变及紫外诱变[D];南京林业大学;2010年
2 罗玉芬;共轭亚油酸高产菌株的筛选、鉴定、培养基和发酵条件优化及紫外诱变研究[D];南昌大学;2011年
3 谢维;果胶高效降解菌株的紫外诱变选育、生物特性及其生物脱胶应用研究[D];南京农业大学;2011年
4 覃玲灵;里氏木霉的紫外诱变和高活性纤维素酶突变株的选育[D];中南林业科技大学;2011年
5 林伟铃;产果胶酶黑曲霉的紫外诱变及其合成调节机制的蛋白质组学研究[D];福建师范大学;2010年
6 董俊丽;深海细菌Martelella mediterranea纤维素酶基因的克隆、表达与酶学分析[D];华中农业大学;2010年
7 陈洁;产谷氨酰胺转胺酶菌株的鉴定及其诱变选育研究[D];中南民族大学;2008年
8 刘峰;碳霉素生产菌株的选育及发酵条件的研究[D];天津大学;2010年
9 王开胜;野油菜黄单胞杆菌纤维素酶基因原核表达及其固定化研究[D];上海交通大学;2012年
10 徐伟佳;桑天牛纤维素酶基因CDS区的克隆及其在大肠杆菌中表达的研究[D];西北农林科技大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前2条
1 特约记者 解小如;山东高含油微藻“炼”油成本低[N];中国化工报;2011年
2 何国庆 张灏;在酶制剂生产中的应用(下)[N];中国食品报;2009年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978