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鲍曼不动杆菌耐药性和β-内酰胺酶基因携带的研究

陆娟  
【摘要】:目的:鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)是目前临床科室中重要的多重耐药菌,其分离率仅次于分离率最高的耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌。本研究拟分析我院各科室分离鲍曼不动杆菌耐药情况,以及与多重耐药鲍曼不动杆菌感染密切相关的各种因素。并进一步着重研究我院呼吸内科患者痰液中分离鲍曼不动杆菌耐药机制,建立穿梭载体p YMAb3在鲍曼不动杆菌中过表达技术,用于重要耐药基因bla OXA-23耐药机制研究。方法:随机收集我院各科室分离鲍曼不动杆菌101例,并收集完整患者治疗信息85例。采用细菌耐药性VITEK-2 Compact全自动细菌鉴定及药敏分析系统和K-B法同时鉴定上述细菌耐药性,并通过患者治疗信息分析与多重耐药鲍曼不动杆菌感染相关危险因素。另收集我院呼吸内科患者痰液中分离的鲍曼不动杆菌160株,其中亚胺培南耐药菌80株,敏感菌80株。根据鲍曼不动杆菌苯唑西林水解酶(OXA)基因合成检测bla OXA-23、bla OXA-24、bla OXA-51和bla OXA-58基因引物,通过多重PCR法检测上述菌株携带OXA基因情况。随机提取4株亚胺培南耐药菌株质粒,并通过PCR法扩增核外质粒中bla OXA-23基因。再次通过PCR法扩增亚胺培南耐药菌bla OXA-23基因全长,与穿梭载体p YMAb3连接后构建可以在鲍曼不动杆菌中表达的bla OXA-23/p YMAb3载体。通过电穿孔法将bla OXA-23/p YMAb3载体导入鲍曼不动杆菌标准株(ATCC 17978),通过硫酸卡那霉素和美罗培南筛选阳性克隆,经RT-PCR法确认bla OXA-23表达。通过稀释法检测p YMAb3空载体转染菌株和bla OXA-23/p YMAb3载体转染菌株对亚胺培南耐药MIC值。结果:我院各科室中多重耐药鲍曼不动杆菌较为常见,其中以ICU科室中多重耐药鲍曼不动杆菌感染最为严重。目前我院鲍曼不动杆菌对替加环素的耐药率最低(14.85%),其次为头孢哌酮/舒巴坦(25.74%),对剩余抗菌药物的耐药率均在50%以上,包括左氧氟沙星53.46%、阿米卡星56.44%,哌拉西林/他唑巴坦61.39%,复方新诺明62.38%,氨苄西林/舒巴坦65.34%,头孢他啶65.34%,妥布霉素66.34%,亚胺培南67.33%,头孢曲松68.32%,庆大霉素71.29%,环丙沙星71.29%,头孢吡肟71.29%。ICU科室中分离出的多重耐药鲍曼不动杆菌显著高于其他科室,并且患者入住ICU时间、总住院时间、机械通气时间、中心静脉置管时间、留置导尿管时间以及分离菌株前一个月使用碳青霉烯类抗生素与患者感染MDRAB菌株密切相关。多重PCR法检测结果表明,我院对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌均携带bla OXA-23基因。鲍曼不动杆菌标准株(ATCC 17978)过表达bla OXA-23基因后,对亚胺培南耐药性提高64倍,其MIC达到32μg/m L。结论:我院鲍曼不动杆菌对亚胺培南等常用抗生素耐药性严重,尤其以ICU科室最为严重。替加环素仍是目前最有效的治疗药物,患者入住ICU时间、总住院时间、机械通气时间、中心静脉置管时间、留置导尿管时间以及分离菌株前一个月使用碳青霉烯类抗生素,上述这些因素与患者感染MDRAB菌密切相关。穿梭载体p YMAb3可以在鲍曼不动杆菌中稳定表达外源基因,是鲍曼不动杆菌重要功能基因的研究的可靠工具。bla OXA-23基因是诱发我院鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药的主要原因,在临床工作中需高度重视该基因水平传播造成医院内多重耐药鲍曼不动杆菌爆发流行。


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