糜酶抑制剂对肺纤维化干预作用的实验研究

【摘要】： 目的观察用糜酶抑制剂(chymase inhibitor,Chy-Ⅰ)对博莱霉素(bleomycin,BLM)致大鼠肺纤维化模型干预作用,对糜酶、转化生长因子-β1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、血管紧张素Ⅱ及其受体AT1的影响,以探讨肺纤维化的发病机制。 方法健康SD雌性大鼠60只随机分三组:正常对照组(生理盐水)、模型组(博莱霉素)、干预组(博莱霉素+糜酶抑制剂)。分别在第7天,第14天,第21天和第28天处死,每组检测5只大鼠HE染色观察支气管肺组织病理改变,支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)白细胞计数及分类,用逆转录-聚合酶链式反应RT-PCR方法测肺组织糜酶和转化生长因子-β_1(TGF-β_1)mRNA表达的含量。酶联免疫吸附法(Enzyme-linked Immuno Sorbent Assay,ELISA)检测BALF中转化生长因子-β_1(TGF-β_1)含量,免疫组化观察肺组织中TGF-β_1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、血管紧张素Ⅱ及其受体AT1蛋白的表达。 结果 (1)肺泡炎程度评价:干预组和模型组比对照组肺泡炎程度明显加重,有显著的统计学差异,但干预组和模型组之间无明显的统计学差异。 (2)肺纤维化程度评价:干预组和模型组比对照组纤维化明显加重,有显著统计学差异,且干预组比模型组明显的减轻,有显著的统计学差异。 (3)BALF细胞计数和细胞分类:干预组和模型组大鼠的BALF中白细胞总数、巨噬细胞、中性粒细胞及淋巴细胞构成比较对照组有显著统计学差异,干预组的中性粒细胞与模型组在第7和14天干预组比对照组减少,有显著的统计学差异。 (4)糜酶、TGF-β_1的mRNA分析:模型组和干预组肺组织中糜酶、TGFβ_1的mRNA的表达持续增强,与对照组有显著的统计学意义,干预组比模型组表达显著减少,有统计学差异。 (5)TGF-β_1蛋白表达分析:模型组BALF和肺组织中TGF-β1蛋白表达持续增强,干预组均明显减少,有统计学差异。 (6)Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达分析:模型组肺组织中Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白均表达持续增强,干预组均显著减少,有统计学差异。 (7)血管紧张素Ⅱ及其受体AT1蛋白表达分析:模型组肺间质中血管紧张素Ⅱ及其受体均表达持续增强,干预组均明显减少,有统计学差异。 结论糜酶抑制剂能减轻博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化,可能是通过下调TGF-β1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、血管紧张素Ⅱ及其1型受体(AT1)的表达而发挥作用。