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南瓜糖蛋白的提取与纯化研究

闫雪梅  
【摘要】: 糖蛋白是一类有糖类同多肽或蛋白质以共价键连接而成的结合蛋白。糖蛋白具有增强免疫调节、抑制肿瘤、降低血糖、血酯、抗氧化、防衰老等作用,在开发新药方面具有较大的应用价值。本文对南瓜粉中糖蛋白的提取、分离、纯化和结构分析展开了研究,主要研究内容和结论如下: 1.以多糖提取的方法进行南瓜粉糖蛋白提取、分离的研究。探讨了水提醇沉法超声辅助提取南瓜粉中多糖的工艺,对影响南瓜粉多糖得率的几个因子,进行了单因素试验和正交试验,方差分析表明:温度和醇沉浓度是影响南瓜粉多糖得率的显著因素:提取的最适条件为温度45℃,醇沉浓度70%,料液比1:16,时间30min,在此条件下,南瓜粉粗多糖的得率为6.63%,纯度为81.91%。利用乙醇分级沉淀和SephadexG-75柱层析相结合的方法将南瓜粉粗多糖分离、纯化,得糖蛋白,得率为1.38%。 2.以蛋白质提取的方法进行南瓜粉糖蛋白提取、分离的研究。探讨了碱溶酸沉法超声辅助提取南瓜粉中蛋白质的工艺,对影响南瓜粉蛋白质得率的几个因子,进行了单因素试验和正交试验,方差分析表明:温度是影响南瓜粉蛋白质得率的显著因素;提取的最适条件为温度60℃,pH8.5,料液比1:16,时间30min,在此条件下南瓜粉粗品蛋白质的得率为6.82%,纯度为81.27%。利用硫酸铵盐析分级和SephadexG-75柱层析相结合的方法将南瓜粉粗品蛋白质分离、纯化,得糖蛋白,得率为0.89%。 3.对南瓜粉中糖蛋白的不同提取方法进行了比较,水提醇沉法简便易行,所需设备少,产品得率高,是较好的提取方法。 4.对南瓜粉糖蛋白进行了简单的结构分析。利用纸层析、SephadexG-75柱层析、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳证明了南瓜粉糖蛋白为均一组分,分子量大约在30000左右。南瓜粉糖蛋白的含糖量为78.06%,含蛋白质为13.74%。紫外光谱表明南瓜粉糖蛋白中存在O-型糖苷键。


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