收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

蛇足石杉内生真菌的促寄主生长作用及发酵产物研究

李娜  
【摘要】: 蛇足石杉是一种重要的药用蕨类植物,目前还没有大面积人工栽培的报道。蛇足石杉生活史与内生真菌的关系密切是其一个重要的生物学特征。本文对蛇足石杉内生真菌的分离技术、内生真菌的形态、及其对蛇足石杉扦插生根、生长发育的影响等内容进行了研究,以期加深对这种低等蕨类植物生物学、生理学上的了解,为人工栽培技术的建立提供理论参考。 本文主要内容和结论如下 (1)蛇足石杉内生真菌的分离方法。比较适合蛇足石杉茎表面灭菌的方法是75%乙醇灭菌2min后用1%NaClO灭菌4min;叶的最佳灭菌方法是75%乙醇灭菌0.5min后用1%NaClO灭菌3min;植物样品剪碎法处理,以1/2PDA(马铃薯葡萄糖培养基)作分离培养基。根部内生真菌的分离可采用无菌水洗涤法。 (2)蛇足石杉内生真菌分离结果。从江西宜黄县、安徽金寨县、安徽宣城市三个产地的蛇足石杉中共分离到内生真菌59株,其中从江西宜黄县蛇足石杉中分离到内生真菌17株,安徽金寨县蛇足石杉中分离到内生真菌20株,安徽宣城市蛇足石杉中分离到内生真菌22株。从内生真菌的分布部位来看,根部的内生真菌种类多于茎、叶。 (3)蛇足石杉的菌根结构。通过对蛇足石杉根部显微观察发现蛇足石杉根部生有大量根毛,部分根毛中生有菌丝,属于内生菌根菌。 (4)蛇足石杉内生真菌的形态学研究。蛇足石杉内生真菌从形态上看种类比较丰富。部分蛇足石杉内生真菌可在PDA培养基上产生孢子,产孢真菌占56%,鉴定分别属于木霉属、单梗曲霉属、青霉属、根霉属、曲霉属、聚孢霉属、粘帚霉属、瓶梗青霉属等。青霉属9株,占15%;聚孢霉属8株,占14%;木霉属5株,占8%。 (5)建立实验室蛇足石杉扦插方法。进行了人工气候箱内的扦插试验,模拟蛇足石杉原生境6月份的条件,设为湿度90%,光照33%(经测定800-12001x),白昼温度22℃,14h,夜间14℃,10h。春季插条在人工气候箱中扦插后的44天左右长出不定根,生根率为77%。 (6)内生真菌对蛇足石杉扦插生根的影响及机理。在上述(5)人工气候箱条件下,蛇足石杉分别在原生境土壤(土壤I)、接种了内生真菌的灭菌土壤(土壤Ⅱ)、灭菌土壤(土壤Ⅲ)上进行扦插,调查蛇足石杉扦插生根率及生根过程中内源物质的变化,结果表明与土壤Ⅲ上的扦插蛇足石杉相比,原生境土壤和施入内生真菌土壤上植株生根率,分别提高了10%和16%,内生真菌影响蛇足石杉体内酚类物质和ⅠAA(吲哚乙酸)的含量,以及POD(多酚氧化酶)和PPO(过氧化物酶)的活性,并提高其扦插生根率,增加生根量。内生真菌促进蛇足石杉插条切口处的愈伤组织形成、分化,从而提高插条切口处生根率。证明内生真菌与蛇足石杉的生长有密切关系。 (7)内生真菌对蛇足石杉生理生化指标的影响。在上述(5)人工气候箱条件下,蛇足石杉分别在原生境土壤(土壤Ⅰ)、接种了内生真菌的灭菌土壤(土壤Ⅱ)、灭菌土壤(土壤Ⅲ)上进行扦插,扦插120天后测定可溶性蛋白含量、可溶性糖含量、PPO、POD活性、黄酮类化合物和石杉碱甲含量。与土壤Ⅲ上的扦插蛇足石杉相比,土壤Ⅱ上扦插植株茎中的可溶性蛋白含量显著提高(P0.05),土壤Ⅰ上扦插植株叶片和茎中的可溶性糖含量显著提高(P<0.05),土壤Ⅰ和土壤Ⅱ上的扦插植株的黄酮类化合物含量显著提高。原生境土壤微生物、内生真菌可以提高蛇足石杉体内的代谢水平。 (8)内生真菌发酵产物的植物活性物质研究。根据形态学初步鉴定结果,选取同时出现在两个产地的蛇足石杉中内生真菌,这种真菌与蛇足石杉共生专一性较强,共选取7株进行研究,xj1,xj2,xj3,xj4,xj5,dg5,dg14。发现2株内生真菌能够分泌ⅠAA,3株真菌发酵液具有PPO活性,3株真菌发酵液具有POD活性。 (9)对蛇足石杉内生真菌发酵产物的AchE(乙酰胆碱酯酶)抑制活性进行了研究。发现有9株内生真菌发酵可产生生物碱,其中4株内生真菌发酵产生的生物碱具有Ache抑制活性,其中抑制活性最强的是xj14菌株发酵产生的生物碱,它对Ache的ⅠC50为134.8280μg.mL~(-1)。 (10)内生真菌的分子鉴定。具有较强Ache抑制活性的菌株xj14属于木霉属。与蛇足石杉共生专一性较强的7株内生真菌分别属于接合菌门和子囊菌门,有3株属于木霉菌属,2株被孢霉属,1株小克银汉属,1株根毛霉属。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 余红英,孙远明,杨跃生;蛇足石杉生物碱的研究[J];时珍国医国药;2002年03期
2 袁珊琴,赵毅民,冯锐;蛇足石杉生物碱成分的研究(Ⅴ)[J];军事医学科学院院刊;2001年01期
3 余红英,孙远明,杨跃进;草药蛇足石杉的研究进展[J];中草药;2001年03期
4 孙远明,余红英,杨跃生,杨金易,张明;HPLC法测定蛇足石杉中石杉碱甲含量[J];中草药;2002年12期
5 袁珊琴,赵毅民;蛇足石杉生物碱成分的研究(Ⅵ)[J];中草药;2003年07期
6 袁珊琴,赵毅民,冯锐;蛇足石杉新碱的结构鉴定[J];药学学报;2002年12期
7 袁珊琴,赵毅民,冯锐;蛇足石杉碱丙的结构鉴定[J];药学学报;2004年02期
8 袁珊琴,赵毅民;蛇足石杉中一个新的Phlegmariurine型生物碱[J];药学学报;2003年08期
9 袁珊琴,赵毅民;蛇足石杉生物碱成分的研究(Ⅳ)[J];中草药;2000年07期
10 顾月华,吴庆庆;高效液相色谱法测定蛇足石杉中石杉碱甲的含量[J];中国药理学通报;2005年08期
11 袁带秀;钟飞;恩特马克·布拉提白;;蛇足石杉过氧化物酶和酯酶同工酶比较研究[J];时珍国医国药;2011年05期
12 袁珊琴,冯锐,顾国明;蛇足石杉生物碱成分的研究(Ⅱ)[J];中草药;1994年09期
13 承曦;陈钧;朱大元;郭尚彬;;抑制乙酰胆碱酯酶活性的蛇足石杉内生真菌筛选[J];时珍国医国药;2008年11期
14 韩邦兴;陈乃富;姚勇;代剑平;徐骅;李媛媛;朱大元;陈钧;;相对湿度对蛇足石杉生理生化指标的影响[J];中华中医药杂志;2009年09期
15 杨虎;马燮;郝世雄;熊瑶;;蛇足石杉中生物碱含量测定方法的研究[J];时珍国医国药;2006年12期
16 李娜;陈钧;朱大元;;土壤微生物影响蛇足石杉扦插生根的机制研究[J];中国中药杂志;2007年23期
17 马燮;刘丽娟;杨虎;周宇;陈虹;;微波辅助萃取蛇足石杉总生物碱的工艺研究[J];中成药;2008年10期
18 周宇;何笑聪;杨郭;;蛇足石杉中黄酮类化合物的提取工艺研究[J];化工时刊;2008年12期
19 黄馨凤;李万成;;蛇足石杉的生态环境研究进展[J];中国林副特产;2011年02期
20 马燮;杨虎;郝世雄;吕发权;周宇;;紫外分光光度法测定蛇足石杉中总生物碱含量[J];应用化工;2007年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 周毅;黄衡宇;;蛇足石杉生态适应性研究Ⅰ茎叶解剖特征的比较[A];第九届全国药用植物及植物药学术研讨会论文集[C];2010年
2 王德立;齐耀东;冯锦东;魏建和;;海南蛇足石杉天然居群与环境因子[A];全国第9届天然药物资源学术研讨会论文集[C];2010年
3 张宪权;田旗;王凤英;蒋云;;蛇足石杉(Huperzia Serrata)在中国分布规律的初步研究[A];中国植物学会七十五周年年会论文摘要汇编(1933-2008)[C];2008年
4 刘祝祥;贺乐;刘艳;瞿专;陈功锡;;蛇足石杉内生真菌的分离及产石杉碱甲菌株的筛选与鉴定[A];第八届全国药用植物及植物药学术研讨会论文集[C];2009年
5 王德立;冯锦东;甘炳春;;蛇足石杉生境及与真菌共生关系[A];第八届全国药用植物及植物药学术研讨会论文集[C];2009年
6 涂艺声;丁明华;;天然石杉碱资源的生物技术开发研究[A];第十届全国药用植物及植物药学术研讨会论文摘要集[C];2011年
7 陈建华;黄少烈;朱宝璋;张扬;;高速逆流色谱制备石杉碱甲单体工艺参数的研究及讨论(Ⅱ)——转速[A];全国中药标准研究学术研讨会论文集[C];2005年
8 杨丽源;温韩东;李治滢;李绍兰;吴少华;陈有为;;千层塔内生真菌多样性研究[A];2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集[C];2008年
9 石晋丽;刘勇;;中药新药研发的选题思路初探[A];中华中医药学会第十届中药鉴定学术会议暨WHO中药材鉴定方法和技术研讨会论文集[C];2010年
10 王峥涛;;对中药、天然药物资源的可持续利用与科学评价标准体系的建立之管见[A];全国第8届天然药物资源学术研讨会论文集[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前8条
1 李秀男;低压组合层析从草药蛇足石杉中同时分离纯化石杉碱甲和石杉碱乙的研究[D];北京化工大学;2005年
2 李娜;蛇足石杉内生真菌的促寄主生长作用及发酵产物研究[D];江苏大学;2007年
3 姬生国;国产石杉科药用植物的分子生物学研究[D];复旦大学;2007年
4 王峻;(一)石杉科药用植物分类学与生药学研究 (二)中国特有植物大叶蒟的抗抑郁活性及其机理[D];复旦大学;2005年
5 李滢;基于高通量测序技术的药用植物表达序列标签系统的构建与应用[D];中国协和医科大学;2010年
6 史云峰;皱边石杉内生真菌的ISSR分析及高产HupA功能内生菌的筛选鉴定[D];湖南农业大学;2012年
7 裴刚;皱边石杉的化学成分及形态解剖学研究[D];湖南农业大学;2003年
8 禹利君;皱边石杉种质资源SSR多态性分析、PS-ID验证与其内生真菌代谢产物研究[D];中南大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张慧;高温胁迫对蛇足石杉生理生化特性的影响[D];中南林业科技大学;2012年
2 包日双;蛇足石杉人工繁殖过程中的限制因素研究[D];西北大学;2013年
3 罗超;蛇足石杉化学成分研究[D];苏州大学;2011年
4 肖艳红;蛇足石杉和黑足鳞毛蕨根际微生态环境的比较研究[D];吉首大学;2013年
5 张洪亮;蛇足石杉内生真菌分离及代谢产物的研究[D];上海师范大学;2011年
6 孙若琼;蛇足石杉产石杉碱甲内生真菌的发酵条件及其产物的初步研究[D];安徽师范大学;2010年
7 王吉祥;一株产石杉碱甲蛇足石杉内生真菌的分离及其发酵条件的初步研究[D];江西师范大学;2010年
8 汪涯;产石杉碱甲蛇足石杉内生真菌的分离与鉴定[D];江西师范大学;2011年
9 李俊;从蛇足石杉中提取石杉碱甲的工艺及中试试验研究[D];吉首大学;2012年
10 杜次;湘西蛇足石杉石杉碱含量及石杉碱甲生物合成LDC基因的克隆与功能表征[D];吉首大学;2013年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者  肖军 通讯员  杨志镍 袁喜良;人工繁殖“蛇足石杉”项目启动[N];湖南日报;2006年
2 记者 肖军通讯员 周圣华 向满红;蛇足石杉人工繁殖获突破[N];湖南日报;2008年
3 姜晨怡;研究型教学:本科生的创新乐土[N];科技日报;2006年
4 本报记者 张咏晴 陈青 陶洪光 倪国和 姜澎;上海新增7位工程院院士[N];文汇报;2001年
5 王峻 吴伟 潘胜利;复旦大学采用新HPLC法寻找石杉碱甲资源[N];中国医药报;2004年
6 杨 昆;寻找现代“记事珠”[N];中国中医药报;2005年
7 记者 徐瑞哲;治疗老年痴呆新药有望两年内上市[N];医药导报;2006年
8 志文;治疗老年痴呆新药未来两年有望上市[N];医药经济报;2006年
9 本报记者左常睿;用现代科技挖掘中草药宝藏[N];科技日报;2002年
10 徐铮奎;植物健脑剂的开发应用[N];中国医药报;2002年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978