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高效毛细管电泳技术在嗜铬细胞瘤和神经母细胞瘤诊断中的应用研究

李伟  
【摘要】: 目的 应用高效毛细管电泳(high performance capillary electrophoresis,HPCE)技术,建立一种可同时检测随机尿中香草扁桃酸(vanillylmandelic acid,VMA)、高香草酸(homovanillic acid,HVA)和肌酐(creatinine,Cr)的方法,以辅助诊断嗜铬细胞瘤、神经母细胞瘤等相关疾病。 方法 1.采用标准品和尿液为分析样品,分别对缓冲体系、分离模式、检测波长、分离电压及毛细管规格等电泳条件进行优化,以实现尿中各待测物与周围杂峰的基线分离。 2.对本研究建立的HPCE法进行系统的方法学评价,包括:线性范围与检出限、重复性试验、回收试验、干扰试验以及方法学对比试验。 3.收集、检测健康成人及儿童随机尿标本各100份,分别建立成人与儿童的VMA/Cr、HVA/Cr参考值范围(μmol/mmol);并以本法对5例嗜铬细胞瘤及2例神经母细胞瘤患者的随机尿标本进行定量分析。 4.选取健康志愿者、嗜铬细胞瘤及神经母细胞瘤患者各1例,分别连续留取5份随机尿标本并采用本法进行测定,以动态观察各待查者尿液VMA、HVA的周期性排泌特点。 结果 1.在毛细管区带电泳(capillary zone electrophoresis,CZE)模式下,以120 mmol/L NaH_2PO_4-Na_2HPO_4(pH 6.80)溶液为缓冲液,在非涂层石英毛细管(47cm×75μm内径)中进行电泳。样品稀释后直接经压力进样(1 p.s.i.,4s),20 kV电压下电泳分离后,通过二极管阵列检测器检测(λ=200 nm)。在该电泳条件下,尿液Cr、VMA和HVA在13 min内即可完全出峰,与周围杂峰达到基线分离。 2.线性评价结果显示,VMA、HVA和Cr分别在0~500、0~500和0~4000μmol/L浓度范围内呈良好线性,相关系数(r)介于0.9972~0.9991(P<0.001);最低检出限(S/N=3)分别为1.0、1.0和50.0μmol/L。 3.尿液VMA、HVA和Cr迁移时间的平均批内(n=10)变异系数(CV)分别为0.58%、0.56%和0.25%,平均批间(n=10)CV分别为0.95%、1.00%和0.48%;峰面积的平均批内(n=10)CV分别为3.78%、3.97%和2.76%,平均批间(n=10)CV分别为4.60%、4.08%和4.42%。 4.本法具有较高准确性,VMA、HVA和Cr的平均回收率分别为98.36%、93.56%和98.85%;儿茶酚胺、5-羟色胺和清蛋白等对检测结果无干扰。 5.方法学对比试验结果显示,本法与HPLC法有较好的相关性,两种方法测得VMA、HVA浓度的相关系数分别为0.9549(P<0.001)和0.9451(P<0.001)。 6.健康成人与儿童随机尿标本的VMA/Cr、HVA/Cr比值均呈偏态分布(n=100),以百分位数法建立其95%参考值,成人尿液VMA/Cr、HVA/Cr的参考值分别为0~4.26和0~1.69(μmol/mmol),儿童尿液VMA/Cr、HVA/Cr的参考值分别为0~10.39和0~4.31(μmol/mmol)。 7.通过对3例待查者随机尿中VMA、HVA含量的动态观察,我们发现,由于受到体内儿茶酚胺动态分泌以及尿液浓缩、稀释等因素影响,人体尿液VMA、HVA的浓度在一天内呈现较大波动;而相对比值VMA/Cr和HVA/Cr则较稳定,数值变化幅度较小,从而证实了Cr对随机尿中VMA、HVA含量的纠正作用,同时也说明了以VMA/Cr、HVA/Cr为检测指标的科学性与合理性。 结论 该法可同时检测随机尿中VMA、HVA和Cr含量,样品用量少,且稀释后直接进样,操作简便、快速,准确度和精密度高,易于自动化,是尿液VMA、HVA常规检测及相关疾病筛查的理想方法。


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