收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

PDGF-BB和PKGIα对血管平滑肌细胞形态和合成表型基因表达的影响

李璟妍  
【摘要】: 目的:明确血小板源性生长因子(Platelet drivde growth factor BB, PDGF-BB)和cGMP依赖的蛋白激酶Iα(cGMP dependent protein kinase Iα, PKGIα)对血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cell, VSMC)形态和骨架的影响,以及对VSMC表型转变的调节,尤其是对合成型标志基因表达的影响。 方法:(1)通过位置特异性重组构建携带PKGIα基因的复制缺陷型腺病毒pAd-PKGIα,并进行病毒滴定测定;(2)采用组织块贴壁法原代培养大鼠主动脉平滑肌细胞(Rat aortic somooth muscle cells, RASMCs);(3)通过RT-PCR方法检测正常培养的RASMCs和大鼠胸主动脉平滑肌细胞株CS-54细胞感染pAd-PKGIα后PKGI a的表达;通过western-blotting方法检测cGMP的类似物8-APT-cGMP对PKGIα的激活作用;(4)光学显微镜观察PDGF-BB和PKGIα对RASMCs和CS-54细胞形态的影响;(5)免疫荧光法观察PDGF-BB和PKGIα对RASMCs和CS-54细胞骨架的影响;(6) Real-time PCR法从基因水平检测PDGF-BB和PKGI a对CS-54细胞合成型代表基因表达的影响;(7) Western blotting法从蛋白水平检测PDGF-BB和PKGIα对CS-54细胞合成型代表基因表达的影响。 结果:(1)构建的pAd-PKGIα通过大量复制和纯化,获得滴度约5×10~(10)pfu/ml。对照病毒pAd-LacZ经扩增、纯化,获得滴度为7.5×10~(10)pfu/ml。最佳转染复数为MOI=100;(2)植块法进行原代培养的细胞经形态学和免疫荧光鉴定证实为VSMC;(3)构建的pAd-PKGIα感染RASMCs和CS-54细胞后,PKGIα的表达明显增多,证实pAd-PKGIα成功感染。通过Western blotting方法证明8-APT-cGMP可以激活PKGIα;(4) PDGF-BB对RASMCs和CS-54细胞的形态和骨架均有影响,这种影响可由PKGIα表达和活性的增加而逆转;(5)PDGF-BB可使CS-54细胞合成型代表基因Epiregulin表达增高,PKGI a和8-APT-cGMP共同作用可逆转这个变化过程,使Epiregulin的表达恢复至对照组水平。而其他合成型代表基因如OPN和MMP2没有类似的变化。 结论:PDGF-BB可使VSMC形态和骨架发生明显改变,由收缩表型细胞去分化为合成表型细胞。PKGIα和8-APT-cGMP可逆转已经发生的去分化变化,使细胞形态和骨架恢复至原有的状态。PDGF-BB能够增高合成型标志基因Epiregulin的表达水平,且其表达同样可以被PKGIα和8-APT-cGMP下调至对照组水平。另外两种合成型标志基因OPN和MMP2不存在这样的改变。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 牟达;何芳;张会敏;钟华;;ERK信号转导通路在PDGF诱导的人动脉平滑肌细胞增殖中的作用[J];石河子大学学报(自然科学版);2006年02期
2 施产甫,许琳,肖祥华;猪PDGF的部分纯化[J];生物化学与生物物理进展;1989年05期
3 Jean L. Mavx ,王为克;与生长因子有关的onc基因[J];中国生物工程杂志;1984年01期
4 许立成,童坦君;血小板衍生的生长因子[J];中国生物化学与分子生物学报;1987年06期
5 童建,L.N.Edmunds;细胞信使与昼夜钟的偶联解析(英文)[J];中国核科技报告;1996年00期
6 景文莉,张向群,王会玲;一氧化氮生理作用研究的回顾与展望[J];承德医学院学报;2003年01期
7 唐兵,何国祥;血管紧张素1型受体和2型受体的交互作用[J];心血管病学进展;2004年S1期
8 陈旭冰;陈光勇;刘光明;;GMP与cGMP的差异[J];中国科技信息;2008年16期
9 葛韵琴,刘新军,张秀娟,刘晨江,魏莫愁;环磷酸鸟苷(cGMP)单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及其特性的鉴定[J];中国生物化学与分子生物学报;1985年03期
10 庞小五,刘克嘉;模拟失重(HDT-6°)对人尿cAMP、cGMP昼夜节律的影响[J];基础医学与临床;1988年05期
11 王关嵩,钱桂生,杨晓静;血管平滑肌细胞与一氧化碳的关系[J];生命科学;1998年06期
12 王关嵩,钱桂生,杨晓静;一氧化碳对大鼠肺动脉平滑肌细胞[Ca~(2+)]、cAMP、cGMP的作用[J];第三军医大学学报;2000年05期
13 张世仪,陈纪君,王松岩,袁勃;与学习记忆相关的脑内cGMP的表达及其与一氧化氮的关系[J];基础医学与临床;2000年01期
14 张春荣,李玲;植物中的钠尿肽系统[J];植物生理学通讯;2001年03期
15 赵立东,李英莉,李宁,李兴启;豚鼠耳蜗中ATP对一氧化氮/环磷酸鸟苷途径的激活作用[J];生理学报;2003年06期
16 曹晋宜;陈庆森;王友湘;阎亚丽;;酪蛋白糖巨肽(CGMP)对小鼠肠道菌群消长规律的影响[J];食品科学;2007年11期
17 金惠铭;癌基因对内皮细胞的调控[J];中国微循环;1993年01期
18 何琪杨;Raf蛋白激酶与细胞信号传导[J];细胞生物学杂志;1996年01期
19 王耿,何国祥,徐晓辉,冉擘力,景涛,陈渝;gax基因对血管平滑肌细胞中p21基因表达的影响[J];医学研究生学报;2005年07期
20 缪家培;环磷酸鸟苷研究的进展[J];中国药理学通报;1986年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 李涛;朱娱;唐婧;范小青;廖自福;陈凤;;PDGF对休克血管反应性的调节作用及初步机制探讨[A];中国病理生理学会第九届全国代表大会及学术会议论文摘要[C];2010年
2 王青洁;霍雷军;朱毅;;PDGF-BB上调血管平滑肌细胞sEH表达的机制及其作用[A];第八届海峡两岸心血管科学研讨会论文集[C];2011年
3 杨莉;赵召霞;田岳颺;许怡;叶立红;高会霞;刘玉珍;侯军良;戴二黑;;软肝化坚颗粒对C57小鼠肝纤维化模型LEP及PDGF的影响[A];第四届中国医师协会感染科医师大会暨传染病诊治高峰论坛、浙江省医学会肝病、感染病学学术年会论文汇编[C];2011年
4 陶辉;李俊;黄成;张磊;黄艳;卞尔宝;李政通;李浩;吕雄文;;5-杂氮-2′-脱氧胞苷对PDGF-BB诱导的HSC-T6细胞增殖与α-SMA表达的影响[A];中国药理学会第十一次全国学术会议专刊[C];2011年
5 姜宗来;齐颖新;;切应力条件下血管内皮细胞与平滑肌细胞间的信息交流[A];第八届海峡两岸心血管科学研讨会论文集[C];2011年
6 武晓静;黄岚;钱德惠;陈剑飞;周音频;晋军;赵刚;;内皮细胞Jagged1下调促进PDGF诱导的大鼠平滑肌细胞增殖迁移[A];全国第十二届心脏学会第十五届心功能学会和《心脏杂志》编委会联合学术会议论文集[C];2011年
7 曹文富;陈益山;焦颖华;;解聚复肾宁对糖尿病肾病大鼠的PKC、VEGF、PDGF-B影响及肾保护作用研究[A];第十一届全国中西医结合肾脏病学术会议论文汇编[C];2010年
8 张东红;谢喜娜;朱毅;;同型半胱氨酸调节血管内皮细胞PDGF表达机制及意义[A];中国病理生理学会第九届全国代表大会及学术会议论文摘要[C];2010年
9 武晓静;黄岚;钱德惠;陈剑飞;周音频;晋军;赵刚;;内皮细胞Jagged1下调促进PDGF诱导的大鼠平滑肌细胞增殖迁移[A];中国心脏大会(CHC)2011暨北京国际心血管病论坛论文集[C];2011年
10 杨莉;叶立红;刘玉珍;侯军良;戴二黑;;慢乙肝患者血清中PDGF和TGF-β1的水平及临床意义[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 路雅茹;血小板衍生生长因子-BB与经皮冠状动脉介入术后再狭窄的相关性研究[D];天津医科大学;2012年
2 尉坤;KLF4在全反式维甲酸和PDGF调节SM22α表达中的作用及机制研究[D];河北医科大学;2011年
3 刘洁琼;PDGF-D在乳腺癌进展、转移及化疗药物运输中的作用和机制研究[D];中南大学;2011年
4 刘爱军;法舒地尔对PDGF诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用及机制研究[D];北京协和医学院;2011年
5 姜隽;血管平滑肌细胞与内皮细胞相互交流的力学生物学机制[D];上海交通大学;2013年
6 赵林;RNA干扰沉默PDGF-D基因对胃癌细胞SGC-7901影响的实验研究[D];重庆医科大学;2010年
7 丁旭娜;TGF-β1、bFGF和PDGF在奶牛乳腺纤维化中作用的研究[D];内蒙古农业大学;2012年
8 王悦;富血小板血浆对MG63,hADSCs及hDFbs细胞生物学行为影响的实验研究[D];吉林大学;2011年
9 杨珊珊;腺相关病毒载体介导人β-NGF和PDGF-B基因联合转染猫角膜内皮细胞的实验研究[D];青岛大学;2012年
10 朱文焕;颅内动脉瘤动物模型的建立及发病机制的研究[D];苏州大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李璟妍;PDGF-BB和PKGIα对血管平滑肌细胞形态和合成表型基因表达的影响[D];江苏大学;2010年
2 高蕊;PDGF-BB对血管平滑肌细胞分化和增殖标志物表达的差异影响[D];河北医科大学;2010年
3 郭艳;PDGF-BB诱导大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞迁移机制的研究[D];大连医科大学;2010年
4 刘新慧;PDGF受体在臀肌挛缩症患者中的表达[D];大理学院;2010年
5 逯义亭;胰岛素干预对糖尿病鼠骨折愈合过程中PDGF表达影响的实验研究[D];泰山医学院;2010年
6 刘大伟;瑞舒伐他汀对PDGF诱导的人脐动脉平滑肌细胞表型转变的影响[D];河北医科大学;2011年
7 杨莉;自体PRP对钛表面成骨细胞增殖的影响及PDGF的变化[D];河北医科大学;2012年
8 孙丽敏;Egr-1诱骗寡核苷酸下调PDGF抑制原代培养的血管平滑肌细胞增殖[D];中国医科大学;2010年
9 张浩然;吡格列酮对5/6肾切除大鼠PDGF-BB与MMP-9表达的影响[D];辽宁医学院;2011年
10 吕淼;ROCK表达下调对PDGF介导的血管平滑肌细胞迁移、增殖的调控[D];大连医科大学;2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 安宁;好医生建欧美cGMP认证标准制剂生产基地[N];经理日报;2009年
2 胡芳;CGMP认证与中国企业渐行渐近[N];中国医药报;2004年
3 黄佩 周思详;cGMP:药企的下一道“紧箍咒”?[N];医药导报;2004年
4 梁朝富;好医生制药3.8亿建cGMP标准生产基地[N];医药经济报;2009年
5 余海若;NO-cGMP信使体系[N];大众科技报;2000年
6 中国医保商会 官宁云 郭晓丹;FDA提议实施药械组合产品cGMP[N];中国医药报;2009年
7 熊昌彪;以岭药业固体制剂车间通过新西兰cGMP认证[N];中国医药报;2009年
8 本报记者 程忠良;国家食药监管局安监司司长:修订GMP实施CGMP[N];第一财经日报;2005年
9 记者 张元忠;“好医生”CGMP标准生产基地奠基[N];四川日报;2009年
10 钟芳 马敬勇;鲁抗大观霉素获德国cGMP认证证书[N];中国医药报;2009年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978