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IL-9在变应性鼻炎患者外周血单个核细胞中表达水平的研究

吉均祥  
【摘要】: 目的: 建立检测IL-9 mRNA的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR的检测方法,并通过检测变应性鼻炎患者Th9的主要细胞因子IL-9的表达水平,初步分析IL-9在变应性鼻炎患者的变化情况,探讨其在该疾病中的意义。 方法: 1)分离健康志愿者外周血单个核细胞(PBMC),采用PCR扩增目的基因序列,T-A克隆,构建目的基因定量PCR检测用质粒标准品。 2)建立检测该基因的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,并评价该方法的线性范围、特异性及精密度水平。 3)采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测变应性鼻炎患者血浆IL-9浓度。 4)收集30例变应性鼻炎患者,19例临床缓解患者,30例健康志愿者外周血标本,均来自江苏大学附属人民医院。运用上述两种方法检测外周血中IL-9的相对表达水平。 结果: 1)重组质粒经测序鉴定为含IL-9目的片段,共110个碱基对,未发生突变,由此构建IL-9定量用检测标准质粒。 2)采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,成功构建的标准曲线相关系数r~2达到0.999以上,最低检出限为10~1copies/μl。 3)变应性鼻炎未治疗组(n=30)外周血中IL-9 mRNA相对表达水平明显高于变应性鼻炎临床缓解组(n=19)和正常对照组(n=30)(P<0.01),而变应性鼻炎临床缓解组外周血中IL-9 mRNA相对表达水平与正常对照组相比较无统计学意义(P>0.05)。ELISA检测水平也呈现相同的结果。 结论: 1)本研究建立了检测IL-9的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。 2)变应性鼻炎患者外周血中存在Th9细胞相关细胞因子IL-9的高表达。IL-9可能参与了变应性鼻炎的病理过程,Th9参与变应性鼻炎病理过程具体机制有待进一步研究。


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