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活性炭纳米佐剂的制备及其免疫效果的初步研究

杨帆帆  
【摘要】:纳米活性炭是将药用活性炭加工至纳米级的一类具有吸附能力强、功能缓释性、靶向性和稳定性的炭材料。在医药上常被用于解毒剂、淋巴示踪剂等。本文通过机械球磨法将常规粒径的药用活性炭加工成纳米活性炭,研究其基本性质及吸附能力,并对其作为疫苗佐剂的潜在可能性进行了尝试性的探索和研究。 1纳米活性炭的制备及相关性质的研究 通过正交试验设计研究纳米活性炭制备的最佳条件,并对其相关性质进行了测定。首先通过对研磨时间、速度、投料量和炭水比例四个影响因素进行考察,然后通过粒径测定及数据分析评价纳米活性炭的最佳制备条件。正交试验结果表明:当研磨时间为10h、转速500rpm、投料量10g、炭水比例为20:80时,制备效果最佳,粒径为244.6±48.73nm。 2纳米活性炭混悬液的制备 通过研究不同的助悬剂对于纳米炭的助悬效果纳米,筛选出助选效果最佳的助悬剂并确定其用量和混悬剂制备的物理条件。首先使用不同浓度的四种助悬剂:吐温80、聚乙烯吡咯烷酮K-30、海藻酸钠、羧甲基纤维素钠制备纳米活性炭混悬液,然后对其粒径、Zeta电位、沉降容积比和重新分散性及超声功率进行了考察。最终确定混悬液的最佳制备条件为:0.3%的聚乙烯吡咯烷酮K-30,200W冰浴超声60s共33次。 3纳米活性炭吸附效果的考察 通过以鸡新城疫病毒Lasota弱毒株、牛血清白蛋白、鸡卵清蛋白、猪口蹄疫O型多肽抗原为模型,考察纳米活性炭对于病毒、多肽及蛋白质的吸附能力,并与常规粒径的药用活性炭吸附能力进行对比,结果证明纳米活性炭的吸附能力要大幅度优于常规药用活性炭。最终确定以猪口蹄疫O型多肽抗原为模型,对纳米活性炭作为疫苗佐剂的免疫效果进行了尝试性探索。 4纳米活性炭佐剂效果的考察 考察纳米活性炭作为猪口蹄疫O型多肽疫苗的佐剂效果。利用最佳制备条件制备纳米活性炭佐剂疫苗,通过释放度和液相阻断ELISA检测方法对其体外缓释作用和免疫原性进行分析,并将猪口蹄疫O型多肽纳米活性炭佐剂疫苗腹腔免疫Balb/c小鼠,以常规油佐剂、空白抗原组为对照,0.2mL/只,分别于一免后,三周进行二免,二免二周后进行三免。通过液相阻断ELISA方法测定抗体滴度。实验结果证明,纳米活性炭在体外虽存在缓释作用,但是其作为佐剂并没有达到预期的缓释和免疫增强效果。


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