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黄瓜离体再生和遗传转化体系的建立

吴振  
【摘要】:黄瓜是一类重要的蔬菜作物,在世界上被广泛栽培。随着分子生物学技术的发展,遗传转化技术已成为许多作物品种改良的重要手段。可是,在黄瓜上无论是组培技术还是遗传转化技术都不够成熟,影响了这些技术在黄瓜育种中的应用。Bi基因是控制黄瓜苦味性状的显性基因。黄瓜苦味会严重影响黄瓜的口感,是黄瓜育种中需要改良的性状。本研究以欧洲温室型黄瓜G8、川白1792、9930、版纳黄瓜为试材,建立了各自适合的再生体系。在此基础上,利用农杆菌介导法将苦味基因Bi导入黄瓜中,获得转Bi基因黄瓜植株。主要结果如下: 1,以子叶块为外植体建立了适合不同基因型黄瓜的离体再生体系。不同品种对培养基的要求存在差异,其中G8的最适出芽培养基配方为MS+1.5mg/l6-BA+0.5mg/l ABA+2.0mg/lAgNO3,每外植体平均再生芽数为4.6个;川白1792和9930的最适培养基配方为MS+2.0mg/16-BA+1.0mg/l ABA+2.0mg/lAgNO3,每外植体平均再生芽数分别为6.5个和5.1个;版纳黄瓜的最适出芽培养基配方为MS+1.0mg/16-BA+0.5mg/l ABA+2.0mmg/lAgNO3,每外植体平均再生芽数为3.7个。 2,遗传转化与转Bi基因植株再生。优化了欧洲温室型黄瓜G8的遗传转化体系,结果表明,侵染时间为15min,AS浓度为20uM,是适合的转化条件。获得了PCR鉴定10株Bi转基因黄瓜植株,对其中3株进行了荧光定量PCR以及叶子中葫芦素C液相色谱的分析,结果表明Bi在转基因黄瓜植株增加表达。


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