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初生仔猪腹泻两种相关病毒分子流行病学调查及病毒分离和鉴定

谈晨  
【摘要】:2011年底以来,我国很多省市初生仔猪出现腹泻性疾病。病猪以腹泻、脱水、厌食、迅速消瘦为主要特征。一些研究结果显示,其主要病原包括猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、轮状病毒和博卡病毒等。为了进一步研究该类疾病的病原流行毒株特性,本研究收集了2012年2月-2013年3月临床发病猪群发病哺乳仔猪肠道粪便样品,进行了猪流行性腹泻病毒(PEDV)和呼肠孤病毒(REOV)检测,明确了PEDV分子流行病学特性,并分离获得2株REOV,为该病防控奠定了一定基础。本研究主要研究内容如下: 1.猪流行性腹泻病毒检测与S基因分子流行病学调查 本研究收集自2012年2月至2013年3月,江苏、上海、浙江等省市31个规模猪场共102份腹泻病料样品,采用RT-PCR检测PEDV,结果为:猪场阳性率67.74%,病料样品阳性率46.08%。测序获得8个流行毒株S全基因序列。8个流行毒株D基因同源性为95.3%-99.5%,与欧洲代表毒株CV777基因的同源性为94.2%-95.7%;与DR13弱毒疫苗毒株比较,其同源性为94.0%-95.8%;与2006年国内流行的LZC毒株比较,其同源性为93.6%-95.1%。S基因遗传进化树分析表明,国内外PEDV毒株可分为3群,本研究7个流行毒株属于第2群,与中国使用的疫苗毒株存在较大差异,只有1个毒株属于第1群,与韩国疫苗毒株以及欧洲毒株CV777共同组成一个分支。研究结果表明,PEDV是目前中国仔猪腹泻的主要病原之一,中国PEDV流行毒株存在明显的基因变异。 2.猪呼肠孤病毒的分离鉴定与仔猪致病性研究 采用上述31个规模猪场102份腹泻病料样品,应用RT-PCR检测REOV,结果为:REOV的猪场阳性率为45.16%,病料样品阳性率为26.47%。选择2份病料无菌处理后接种Vero细胞,维持液中添加5μg/mL胰酶,传代2-3次,出现细胞病变,经过RT-PCR扩增和基因序列分析,病毒粒子负染电镜观察,证明其为REOV,命名为ZJ120101和AH120411毒株。将其分别口服接种2日龄商品健康仔猪,DMEM为对照组,5mL/头,接种后隔离饲养,人工哺乳,观察临床症状,接种后5-7天进行病理观察,并检测病原。结果为:两个病毒接种组仔猪接种后不同时间出现短时的食量下降,但均无腹泻症状,对照组仔猪未见明显发病症状。病理观察结果显示,AH120411毒株组小肠有轻微鼓气,组织病变观察,盲肠肠绒毛上皮细胞破损、脱落,其余肠段未见明显病理变化,ZJ120101和对照组仔猪没有明显的病理变化。肠道组织RT-PCR检测REOV结果为:ZJ120101组和AH120411组阳性,对照组为阴性。表明两个分离株有轻度致病作用,不同REOV毒株对仔猪致病性有所差异。


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