猪伪狂犬病毒新流行毒株抗原变异与灭活疫苗体液免疫特性研究

【摘要】：伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus, PRV)属于疱疹病毒科α-疱疹病毒亚科,是一种有囊膜的双链DNA病毒,可感染牛、羊、狗、猫、山羊、鸡、浣熊及野生动物等,猪是伪狂犬病毒的天然宿主。伪狂犬病主要引起新生仔猪的神经症状和死亡,以及妊娠母猪流产、死胎,在猪群中常呈爆发流行,对我国乃至全世界的养猪业造成了巨大损失。2011年以来,我国很多PRV疫苗免疫的规模化猪场爆发伪狂犬病疫情。2011年底,浙江某规模猪场免疫猪群爆发疫情,本实验室从疑似伪狂犬病的仔猪脑组织病料中分离获得PRV ZJ-01株。本文对PRV新分离毒株ZJ-01的中和抗原特性进行分析鉴定,并对PRV灭活疫苗进行了初步研究。具体研究内容如下：1.伪狂犬病毒新流行毒株中和抗原特性为了进一步了解PRV毒株ZJ-01是否存在抗原变异,我们选择不同商品化PRV活疫苗(Bartha-K61、Bucharest和HB-98株)免疫的3个规模化猪场健康猪群,分别采集9—11份仔猪血清,采用PRV gB和gE ELISA抗体试剂盒(IDEXX公司)检测抗体,结果为：gB抗体均为阳性,gE抗体均为阴性。采用PRV新流行毒株ZJ-01株和传统的PRV LA毒株分别进行血清中和抗体测定,结果显示,3个毒株活疫苗免疫血清与ZJ-01株中和抗体效价明显低于其与LA株中和抗体效价。同时,ZJ-01株抗血清10份与ZJ-01株和LA株的中和抗体效价相似,计算出其变异系数R值为0.255～0.378,证明该猪场流行的PRV毒株抗原性发生明显变异,从而为控制该病的传播和蔓延及新型疫苗研制奠定了理论基础。2.伪狂犬病毒灭活疫苗制备与小鼠体液免疫特性本研究采用甲醛和过氧化氢两种灭活剂对重组伪狂犬病毒毒株(rZJ-011G)分别进行灭活处理,筛选出灭活条件为：0.1%甲醛37℃处理12h和14h；1%过氧化氢4℃灭活处理4h和5h。将灭活病毒液与CPH水性佐剂混合制成灭活疫苗,取6～8周龄ICR清洁级小鼠随机分为5组,每组10只,第1～4组分别接种上述4种灭活疫苗,0.2m1/只,第5组皮下注射DMEM营养液作为阴性对照,间隔3周后用相同方法加强免疫一次,隔离饲养观察。首免后第3、6周分别采血,检测PRV ELISA抗体水平,第6周检测其中和抗体水平。结果为：首免后3周,4个疫苗组即可检测到ELIS (?)抗体,加强免疫后ELISA抗体平均达1：17000；0.1%甲醛12h灭活疫苗组中和抗体平均为1：8,而过氧化氢灭活疫苗组无明显中和抗体,表明PRV甲醛灭活效果优于过氧化氢灭活效果,从而为该病疫苗研究奠定了基础。