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嗜水气单胞菌J-1株W菌毛的提纯、特性分析及其基因定位

朱兴国  
【摘要】: 对嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)鱼源分离株J-1株的W 菌毛的表达特性、生化免疫特性和生物学功能进行了研究,证明其具有介 导细菌粘附宿主细胞的能力,是细菌重要的粘附素,在致病过程中起重要 作用。 经EM、SDS-PAGE、免疫转印和紫外检测等证实,Ah J-1株在37℃ 不能表达W菌毛,28℃时用TSB、LB培养Ah J-1株W菌毛表达良好, 而普通肉汤中表达很差。在变性剂2-巯基乙醇的存在下W菌毛只呈现一 条带,证实此菌毛中不具有多亚基结构。用(NH_4)_2SO_4沉淀提取W菌毛 蛋白,50%较30%效果好。 通过血凝和血凝抑制试验、EPC、HEp-2细胞粘附和粘附抑制试验, 证实W菌毛作为粘附素可介导细菌粘附细胞、非菌毛粘附素S层和外膜蛋 白(OMP)等也同时参与粘附过程。其中W菌毛抗体抑制细菌粘附力达 80%以上,它与抗S层抗体、抗OMP抗体三者共同作用时,细菌的粘附数 几乎为零。而三者中任何两种抗体共同作用,均较其中任何一种抗体抑制 细菌粘附的能力强。Ah J-1株粘附素受体具有甘露糖、胆固醇成分,没有 葡萄糖成分。 用限制性内切酶EcoRⅠ对Ah J-1株基因组DNA酶切,并连接到质粒 载体puc19中,于大肠杆菌DH5α中表达,筛选到含W菌毛基因的一个 DNA片段。


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