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生长抑素基因工程疫苗相关检测方法的研究

张晓娟  
【摘要】: 本文首先建立了测定激生Ⅰ号苗中HBsAg和SS含量的ELISA定量分析 方法。应用本法对激生Ⅰ号苗中HBsAg和SS含量进行分析,可以反映激生Ⅰ 号苗在鸡胚上的增殖情况,是苗的一个必要的质量控制指标。试验数据表明, 苗中HBsAg与SS的表达量之比约为200-250:1,这与利用RIA进行的表达量 分析结果接近。 利用特定的渗透休克法提取基因工程表达的产物作为抗原,经一定的处理 进行包被,建立了检测激生Ⅰ号苗免疫动物血清中SS抗体的间接ELISA检测 技术。另外还建立了测定HBsAg抗体的间接ELISA技术,这两种方法经阻断 试验和重复性试验,表明方法的特异性良好、重复性良好。应用这两种方法对 激生Ⅰ号苗免疫动物血清进行检测,表明动物产生了一定量的SS抗体及 HBsAg抗体。 通过试验研究,确定了10~7PFU/头为激生Ⅰ号苗对肉猪的最适免疫剂量。在 免疫后2周与10周,10~7组的增重分别比对照组提高16.85%、10.1%,达到显 著水平(P<0.05),到试验结束时,该组增重比对照组提高7.6%,即4.02千 克。剂量过大或过小增重效果均不好。另外,饲养管理水平及疾病因子对该疫 苗的免疫效果影响很大。 利用pET-32大肠杆菌融合表达系统,以硫氧还蛋白(Thioredoxin)为表 达载体,已研制成了可用于多次免疫的SS基因工程亚单位疫苗,视插入位点 不同分为2株基因工程体,其表达的SS融合蛋白分别为SS-N/X和SS-N/S。 将它们分别与弗氏不完全佐剂乳化制成疫苗,免疫BALB/C小鼠,中和动物 体内的SS,从而促进动物的生长。结果表明,激生N/X和N/S苗对雌性小鼠 的增重效果显著,分别比对照组增重30.54%、36.88%(P<0.05),而且该苗对 二 倾l:论义:主长抑凭基因工程疫苗相关检测方法的研究 小鼠的增重效果有显著的性别差异,雌性小鼠的增重效果要好于雄性小鼠。 本文还利用特异的抗原包被技术,建立了测定激生N八和N书苗兔疫动物 血清中SS抗体的ELISA测定方法。试验表明,该法特异性强、重复性好。应 用该法对小鼠血清的 SS抗体检测表明,激生N八和 N乃茵免疫动物后,动物 产生了一定量的SS抗体,且SS抗体可以维持3-4个月。


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