收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

鸡传染性支气管炎病毒JS/95/03和SD/97/01株S1糖蛋白在昆虫细胞中的表达及其免疫原性评价

戴亚斌  
【摘要】: 用RT-PCR法分别扩增了IBV肾型毒株JS/95/03和呼吸型毒株SD/97/01的S1全基 因,并克隆到pMD18-T克隆载体中。通过酶切鉴定基因的插入和连接方向,构建了分别 含JS/95/03和SD/97/01的S1基因的重组质粒pMDJS95032S1和pMD9701S1。对两个毒 株的S1基因测序后与10个参考毒株进行了比较和分析。结果表明,JS/95/03和SD/97/01 分别与M41和H120株亲缘关系最近,它们可能是疫苗毒株的变异株;JS/95/03和SD/97/O1 的亲缘也较近,两者S1蛋白间仅有23个氨基酸的差异,其中有15个位于前130个氨基 酸中。在126位氨基酸附近存在着6个氨基酸的差异(116、117、118、128、129、130位), 该区域可能与两毒株的致病性差异有关。根据氨基酸序列对两毒株S1蛋白的二级结构进 行了预测,比较后发现一个或极少数氨基酸的差异即可导致S1蛋白二级结构和抗原性的 改变。 为了构建表达IBV S1蛋白的重组杆状病毒,用BamH I和Sal I对重组克隆载体和杆 状病毒转座载体pFASTBACTHa进行双酶切,回收目的DNA片段并连接后,转化大肠杆菌 DH5α,获得了重组转座载体pFASTJS9503S1和pFASTSD9701S1,然后分别转化含有杆 状病毒穿梭质粒的大肠杆菌DH10BAC感受态细胞,获得分别含两个IBV毒株的S1基因的 重组穿梭质粒rBacmidJS9503S1和rBacmidSD9701S1。采用CellFECTIN将重组穿梭质粒 DNA转染昆虫Sf9细胞后,获得含S1基因的重组杆状病毒rAcJS9503S1和rAcSD9701S1。 重组杆状病毒感染Sf9细胞后,用SDS-PAGE、Western blot和IFA对细胞表达产物进行检 测。结果显示:IBV JS/95/03和SD/97/01株的S1基因在昆虫细胞中得到了正确表达。虽 然它们糖基化不完全,但仍具有天然蛋白的抗原性。 用感染重组病毒rAcJS9503S1或rAcSD9701S1的细胞裂解液对2周龄的伊沙公雏进 行了免疫保护试验,根据免疫鸡抗体动态变化和攻毒后鸡肾脏和气管保护力对细胞表达的 S1蛋白免疫原性进行了评价。试验结果表明,本研究构建的重组杆状病毒表达的S1蛋白 可以诱导抗体产生和免疫保护反应,两个毒株间也有一定程度的交叉免疫保护存在。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 杨耀;;无蛋白培养基制备的钩端螺旋体全菌体菌苗和外膜菌苗对狗的免疫原性[J];国际生物制品学杂志;1983年06期
2 刘阳;;蛋白质的免疫原性——免疫应答的需要和限制[J];医学分子生物学杂志;1987年02期
3 李燕;;用DNA重组技术制备的纯化乙型肝炎疫苗的安全性和免疫原性[J];国际生物制品学杂志;1988年03期
4 刘克;;乙型肝炎病毒颗粒和HBsAg丝状体上S区和前S区的免疫原性[J];国际生物制品学杂志;1989年01期
5 蒋玖;成人口服霍乱活菌苗CVD103-HgR的安全性,免疫原性及排泄特点[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;1994年04期
6 熊涛;缺失gE、gG和US2基因的1型牛疱疹病毒疫苗的免疫原性和保护效果[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;2000年02期
7 林端端;3型副流感活疫苗在幼婴中是减毒的并具有免疫原性[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;2004年04期
8 王晓琳,鲍朗,朱庆平,龙洋,张会东,钟琪;结核分枝杆菌免疫相关蛋白PPE68的表达及免疫原性的研究[J];四川生理科学杂志;2005年02期
9 朱来华;陆承平;梁成珠;谢红梅;吴华;马丰忠;王树峰;于红光;;马疱疹病毒1型gD基因主要中和抗原区在大肠埃希氏菌中的表达[J];中国兽医科学;2005年12期
10 郑贤红;李凡;张守勤;;超高压对CB_3V毒力及免疫原性的影响[J];吉林大学学报(医学版);2006年01期
11 王春来;刘思国;王牟平;彭永刚;宫强;孔宪刚;;胸膜肺炎放线杆菌ApxII毒素结构基因的原核表达以及重组蛋白的免疫原性分析[J];中国预防兽医学报;2006年01期
12 杜宝中;谢轶;贾文祥;杨发龙;曾蔚;杨维青;程曦;陈恬;张再蓉;;铜绿假单胞菌Quorum-Sensing系统中rhlR基因的克隆表达及其免疫保护性研究[J];四川大学学报(医学版);2006年05期
13 乔瑞洁;陈晓航;张勇;任克明;孔素娟;张轶;刘爱萍;沈荣;谢贵林;朱家鸿;;18C型肺炎球菌荚膜多糖-TT结合物中多糖片段长度对其免疫原性的影响[J];中国生物制品学杂志;2007年05期
14 郑继平;郭桂英;韦双双;周海龙;张兆山;;不同培养基对肠毒素大肠杆菌载体疫苗株免疫原性的影响[J];海南大学学报(自然科学版);2007年02期
15 王选锭;费敏;章锐锋;翁宏飚;牛宝龙;;金黄色葡萄球菌RAP重组蛋白的高效表达及其免疫原性初步研究[J];中华微生物学和免疫学杂志;2007年07期
16 唐思静;刘惠莉;;大肠埃希菌热敏性肠毒素B亚基研究进展[J];动物医学进展;2008年02期
17 张辉;王兴龙;李晓艳;张爱玲;张付贤;崔丽瑾;卜昭阳;;单增李斯特菌ActA的表达与免疫原性研究[J];中国卫生检验杂志;2008年05期
18 陈轶霞;才学鹏;景志忠;丁军涛;王颖;蒙学莲;张燕;贾万忠;乔军;闫鸿斌;房永祥;陈国华;骆学农;;羊痘病毒P32基因真核表达载体的构建、表达及其免疫原性[J];病毒学报;2008年02期
19 曹永萍;曹光伟;;鸡传染性法氏囊病病毒的分离鉴定及生物学特性研究[J];中国畜牧兽医;2008年11期
20 李蕾;张万江;吴芳;王萍;杜燕;;卡介苗ERP基因缺失突变株免疫原性的研究[J];石河子大学学报(自然科学版);2008年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 杨恒;曹三杰;黄小波;文心田;;猪传染性胃肠炎病毒DNA疫苗的构建与免疫原性研究[A];中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集(下册)[C];2009年
2 岳红云;贺翔鸽;;Nogo—66蛋白的免疫原性研究—在体实验[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年
3 李忠明;张颖;黄嘉璐;何为;刘庆良;张洪勇;熊思东;;采用嵌合基因技术增强结核杆菌ESAT-6抗原在小鼠和猴子体内免疫原性的研究[A];2005年中国防痨协会全国学术会议论文集[C];2005年
4 李擎天;朱泳璋;褚嘉祐;张庶民;郭晓奎;;GM-CSF对重组百日咳DNA疫苗免疫原性的作用[A];首届全国微生物基因组学学术研讨会会程与论文摘要集[C];2006年
5 王雪峰;杨彬;王帅;林跃智;吕晓玲;赵立平;王凤龙;周建华;;EIAV强毒株和弱毒疫苗株gp90基因差异与免疫原性关系研究[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年
6 徐云升;;高危型HPV新型免疫原MAP的分子设计及其免疫原性鉴定[A];中华医学会第16次全国皮肤性病学术年会摘要集[C];2010年
7 刘一尘;张春杰;程安春;程相朝;汪铭书;李银聚;吴庭才;易明林;;NDV HN基因的毕赤酵母表达及免疫原性分析[A];第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛论文集(下册)[C];2008年
8 闫艳丽;郭宇;张华春;;猪肺炎支原体病原性概述[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会论文集[C];2008年
9 罗贤忠;黄青云;;禽大肠杆菌血清型O_2、O_(78)融合双价弱毒菌株免疫原性的研究[A];面向21世纪的科技进步与社会经济发展(下册)[C];1999年
10 贾晓晖;程健君;何多姣;李双霞;田颖新;贾天军;;感染CPn人群中CPn0308免疫原性分析研究[A];河北省免疫学会第六次免疫学大会资料汇编[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 戴亚斌;鸡传染性支气管炎病毒JS/95/03和SD/97/01株S1糖蛋白在昆虫细胞中的表达及其免疫原性评价[D];南京农业大学;2001年
2 井申荣;微载体制备甲肝灭活疫苗的研究[D];中国协和医科大学;2000年
3 蒋尔鹏;应用RNA干扰技术降低人胚胎心脏袓细胞免疫原性的实验研究[D];第二军医大学;2012年
4 刘淑杰;大肠杆菌粘附素亚基FaeG在Lactococcus lactis中的表达及免疫原性研究[D];江南大学;2010年
5 罗源;丙型肝炎病毒高变区1对HCV E2蛋白免疫原性抑制作用研究[D];第二军医大学;2010年
6 沈美龙;基于DNA免疫的乙型肝炎病毒表面抗原大中小蛋白的免疫原性研究[D];南京医科大学;2010年
7 张荣光;幽门螺杆菌omp11和lpp20基因的克隆及表达产物免疫原性和保护效果研究[D];郑州大学;2004年
8 田美娟;天坛痘病毒载体改造及其对HIV重组疫苗免疫原性的影响[D];中国疾病预防控制中心;2010年
9 王希;新型流感病毒样颗粒疫苗在老龄小鼠中免疫原性研究[D];第四军医大学;2011年
10 李国江;吉林地区PRRS流行病学调查及真核疫苗构建与免疫原性研究[D];吉林大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王素华;鸡E.tenella 5401基因的克隆及免疫原性的研究[D];浙江大学;2004年
2 甘黎明;鸡大肠杆菌1型菌毛的抗原性分析及pi/A基因表达载体构建[D];扬州大学;2005年
3 唐艳;TRP-2_(180-188)CTL表位之APL的设计和评价[D];第三军医大学;2005年
4 陈金武;聚乙二醇化重组人生长激素的免疫原性、生物活性及药代动力学研究[D];安徽大学;2007年
5 赵洁;鸭疫里默氏杆菌自然弱毒株的部分特性研究[D];西南大学;2008年
6 张莉;猪肺炎支原体MY-99株的培养特性、致病性及免疫原性研究[D];四川农业大学;2008年
7 原野;重组人干扰素-β1b临床前长期毒性和免疫原性的评价和研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2003年
8 孙会来;人免疫缺陷病毒重组非复制型痘苗病毒的构建及其免疫原性研究[D];吉林大学;2007年
9 张振华;鸭致病性肠炎沙门氏菌外膜蛋白组成及免疫原性研究[D];四川农业大学;2008年
10 臧大鹏;牛结核分支杆菌外膜蛋白OMP37、OMP12基因的克隆表达及免疫活性检测[D];山东农业大学;2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者杨健;肿瘤细胞遨游太空后发生变化[N];人民日报;2003年
2 齐继成编译;PowderJect的Fluvirin进入Ⅰ期临床[N];医药经济报;2003年
3 贤人;唐教授谈流感疫苗[N];保健时报;2003年
4 张路 王立成;我国流感疫苗的研发史[N];健康报;2003年
5 本报记者 洪天语;GLP,困于钱财和人才[N];医药经济报;2004年
6 记者 李泳沩;长春百克多个新药进入临床研究[N];吉林日报;2009年
7 王兴波;我国兽用生物制品业面临的选择[N];中国畜牧报;2005年
8 王;乙肝疫苗成本有望减少[N];医药经济报;2002年
9 黄敏燕 译;静脉用Ferumoxytol可安全有效治疗贫血症[N];中国医药报;2009年
10 记者 张周来 吴小康;志愿者接种正常[N];新华每日电讯;2009年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978