收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

猪链球菌2型毒力相关蛋白的检测及其基因片段的克隆与表达

欧瑜  
【摘要】: 136kD的溶菌酶释放蛋白(muraminidase-released protein,MRP)和110kD的胞外蛋白因子(extracellular protein factor,EF)是猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2)的毒力相关蛋 白。提取猪链球菌2型江苏分离株HA9801的胞壁蛋白和胞外蛋白, 分别进行SDS-PAGE,切割相对分子量为136kD的MRP和110kD 的EF,按常规方法制备其抗体。用此抗体分别以免疫转印和ELISA 法检测猪源链球菌18株国内分离株、1株德国分离株及1株猪链球 菌2型人分离株的毒力相关蛋白。 提取20株待检菌株的胞壁和胞外蛋白,经测SDS-PAGE,与HA9801 株的MRP和EF的抗体作免疫转印。结果显示,11株MRP阳性,10 株EF及EF~*阳性,MRP及EF的分布存在4种表型:MRP~+EF~+(8/20), MRP~+EF~*(1/20),MRP~+EF~-(1/20),MRP~-EF~-(10/20)。 以培养上清作抗原,分别以马链球菌兽疫亚种参考株 ATCC35246和江苏分离株HA9801为阴性与阳性对照,建立了 Dot-ELISA和间接ELISA检测法。结果显示,两种ELISA的检测结 果一致,MRP和EF的阳性率均为61%(11/18)。和Dot-ELISA相 比,间接ELISA包被抗原的时间较长,背景也较深,但血清用量少。 和免疫转印相比,ELISA只需用细菌培养上清作抗原进行检测,不 需进一步处理,而且灵敏度很高,可用于大规模流行病学调查。 根据猪链球菌2型MRP和EF的基因序列,用DNAstar软件预 测了抗原决定簇。根据预测结果,选定相应基因片段在大肠杆菌中 克隆和表达。用BLAST软件将MRP和EF的氨基酸序列分别与Genebank 中的蛋白质序列数据库进行同源性比较,结果表明,MRP与10种蛋白有 27~33%的同源性,但与A群链球菌的M蛋白无同源性。根据已有信息 绘制了MRP结构模式图。EF与肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae) 的IgAl蛋白酶有48%的同源性。 以HA9801的基因组DNA为模板,通过PCR技术,分别扩增 mrp基因304~1168bp序列和epf基因1207~1675bp序列,并按正 肉京农业大学博士学位沦文 确的阅读框架分别定向克隆到表达羹体pQEXJp!中谷恍甘肽转移 酶(GST)基因的下游;将重组质粒转化人大肠杆菌 BL21株,经 IPTO 诱导,可分别表达分子量约为57kD(含MRP片段)和41kD(含EF 片段)的融合蛋白。用MRP抗血清进行的免疫转印分析表明,57kD 的融合蛋白可被MRP抗血清识别,显示该融合蛋自具有MRP的抗 原表位;用 EF抗血清进行的免疫印迹分析表明,4比D的融合蛋白 不能被EF抗血清识别,说明BF的抗原决定碟不存在于epf基因 。1207~1675hp序列编码的肽链中。以上结果为进一步研究MRP和 EF的结构和功能提供了方便。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 曾巧英,陆承平;猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白的黏附作用[J];南京农业大学学报;2002年04期
2 王海丽;王长军;陆承平;潘秀珍;唐家琪;;猪链球菌2型人源分离株截短的溶菌酶释放蛋白基因的克隆及原核表达[J];细胞与分子免疫学杂志;2006年02期
3 徐公义;王海丽;葛长城;王长军;唐家琪;;猪链球菌2型人源株MRP的表达及其单克隆抗体的制备与应用[J];中国兽医学报;2009年07期
4 李耿;孙长江;韩文瑜;雷连成;;猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白功能性片段的原核表达及其免疫保护性[J];中国生物制品学杂志;2008年01期
5 孙瑜隆;柳纪省;魏虎来;李学瑞;;猪链球菌2型mrp基因ORF1序列的克隆及原核表达[J];中国兽医科学;2007年08期
6 欧瑜,陆承平;猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白基因片段的克隆与表达[J];农业生物技术学报;2002年01期
7 曾巧英,陆承平;溶菌酶释放蛋白介导猪链球菌2型的血凝活性[J];中国兽医科技;2002年07期
8 倪艳秀,何孔旺,何家惠,王继春,俞正玉,侯继波,吕立新;猪链球菌2型SS_2-1和SS_2-H株的培养稳定性检测[J];中国兽医科技;2002年04期
9 欧瑜,陆承平;猪链球菌2型国内分离株毒力相关蛋白的分析[J];微生物学报;2002年01期
10 李明,何孔旺,陆承平;猪链球菌2型MRP与EPF基因串联表达蛋白及其免疫保护作用[J];中国农业科学;2005年06期
11 秦春圃;;4株猪链球菌2型分离株主要毒力因子(MRP、EF)的全基因序列分析[J];生物技术通报;2008年03期
12 何孔旺,陆承平;猪链球菌2型的致病特性与毒力因子[J];中国兽医科技;2000年09期
13 倪艳秀,何孔旺,何家惠,王继春,吕立新;猪链球菌2型溶血素基因的检测及其序列分析[J];中国兽医科技;2002年11期
14 段志涛;何孔旺;张雪寒;倪艳秀;陆承平;;猪链球菌2型次黄嘌呤核苷酸脱氢酶基因的克隆与鉴定[J];微生物学报;2006年05期
15 倪艳秀,何孔旺,王继春,何家惠,还红华,陆承平,姚火春;检测猪链球菌2型胞外因子(EF)的PCR方法的建立[J];中国人兽共患病杂志;2001年04期
16 曾巧英,陆承平;猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白诱导上皮细胞融合和凋亡[J];微生物学报;2003年03期
17 徐公义;王海丽;葛长城;王长军;唐家琪;;SS2人源分离株ZYH24 EF的表达纯化及其单克隆抗体的制备[J];中国人兽共患病学报;2009年01期
18 王继春,何家惠,侯继波,徐筠遐,刘冬霞,褚长贵,王伟峰,刘跃兴,杨英;猪链球菌2型与马链球菌兽疫亚种生物学特性的初步比较[J];中国预防兽医学报;2000年S1期
19 范红结,陆承平,唐家琪;猪链球菌2型mrp基因免疫功能片段的克隆、表达及动物试验[J];微生物学报;2004年01期
20 高尚庆;雷连成;韩文瑜;;猪链球菌2型主要毒力因子研究进展[J];中国生物制品学杂志;2006年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 倪艳秀;何孔旺;王继春;何家惠;还红华;陆承平;姚火春;;检测猪链球菌2型的溶菌酶释放蛋白(MRP)的PCR方法的建立[A];猪的重要传染病防治研究新成果——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第五届理事会第二次全体会议暨防检疫专业委员会第7次学术交流会论文集[C];2002年
2 欧瑜;陆承平;;猪链球菌2型毒力相关蛋白的检测及其基因片段的克隆与表达[A];新世纪 新机遇 新挑战——知识创新和高新技术产业发展(上册)[C];2001年
3 高尚庆;雷连成;;猪链球菌2型主要毒力因子研究进展[A];2006中国微生物学会第九次全国会员代表大会暨学术年会论文摘要集[C];2006年
4 郭桐生;鲍春梅;崔恩博;李永利;曲芬;聂为民;李伯安;毛远丽;;一起Ⅱ型猪链球菌疫情的鉴定报告[A];中华医学会第八次全国检验医学学术会议暨中华医学会检验分会成立30周年庆典大会资料汇编[C];2009年
5 方勤美;黄绍谦;俞伏松;朱继昌;林天龙;;猪链球菌2型福建分离株的主要毒力基因分析[A];福建省畜牧兽医学会2009年学术年会论文集[C];2009年
6 王华;赵云玲;王君玮;王志亮;陈义平;;猪链球菌2型致病机制的研究新进展[A];全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2006年
7 杨承槐;赵启祖;宋立;宁宜宝;;猪链球菌毒力因子检测[A];全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2006年
8 刘军;冯书章;石谦;孙洋;张东;尹铁勇;郭学军;高宏伟;涂长春;;四川资阳地区猪链球菌2型检测及其特性比较研究[A];全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2006年
9 何孔旺;倪艳秀;王继春;何家惠;吕立新;陆承平;姚火春;;猪链球菌2型的快速诊断与分子流行病学研究[A];新世纪 新机遇 新挑战——知识创新和高新技术产业发展(上册)[C];2001年
10 倪艳秀;何孔旺;王继春;何家惠;吕立新;陆承平;姚火春;;PCR检测和定型猪链球菌2型的研究[A];猪的重要传染病防治研究新成果——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第五届理事会第二次全体会议暨防检疫专业委员会第7次学术交流会论文集[C];2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 欧瑜;猪链球菌2型毒力相关蛋白的检测及其基因片段的克隆与表达[D];南京农业大学;2001年
2 张炜;猪链球菌2型免疫蛋白组学和比较蛋白组学研究[D];南京农业大学;2007年
3 魏子贡;猪链球菌流行病学及其生物被膜形成机理研究[D];华中农业大学;2010年
4 李学瑞;猪链球菌防治新技术研究[D];中国农业科学院;2011年
5 郑霄;基于芯片的猪链球菌比较基因组学研究[D];中国疾病预防控制中心;2011年
6 郝淮杰;猪链球菌与人脑微血管内皮细胞相互作用研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2011年
7 田云;猪链球菌7型的分型与抗性的研究及猪链球菌2型可能的毒力基因的发现[D];南京农业大学;2003年
8 吴宗福;猪链球菌毒力因子与免疫原性蛋白的筛选及斑马鱼模型转录组研究[D];南京农业大学;2009年
9 马有智;猪链球菌溶血素基因的克隆及其原核和真核表达[D];浙江大学;2003年
10 吴全忠;猪链球菌2型在模型动物豚鼠体内的动态分布及基因免疫[D];南京农业大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张静;猪链球菌二氢硫辛酰胺脱氢酶的生物学功能初探及串联蛋白的免疫保护评价[D];上海交通大学;2012年
2 孙瑜隆;猪2型链球菌MRP基因的克隆及表达[D];兰州大学;2007年
3 王宝松;猪链球菌2型MRP-FBP串联黏附素的免疫保护力[D];甘肃农业大学;2009年
4 张玲妮;猪链球菌2型MRP单克隆抗体的制备及血清抗体的检测[D];南京农业大学;2004年
5 郝春燕;猪链球菌2型的分离鉴定及PCR检测[D];西北农林科技大学;2010年
6 刘燕;猪链球菌2型主要毒力相关基因克隆、表达及其在检测中的应用研究[D];吉林大学;2007年
7 李明;猪链球菌2型MRP与EPF部分片段串联表达与免疫原性及检测两种猪源链球菌抗体间接ELISA方法的建立与应用[D];南京农业大学;2005年
8 刘亚彬;猪链球菌2型IMPDH基因功能结构域的确定[D];南京农业大学;2007年
9 甘淑珍;2型猪链球菌表面蛋白Hp0272参与逃逸宿主天然免疫的分子机制研究[D];华中农业大学;2012年
10 赵焕灿;浙江省猪链球菌血清及分子流行病学调查[D];浙江大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 郑灵巧;猪链球菌研究进展改变救治原则[N];健康报;2009年
2 周才祥;猪传染性胸膜肺炎与猪链球菌混合感染的诊治[N];中国畜牧兽医报;2009年
3 记者 朱敏丽 通讯员 潘越;中国医药城首批融合蛋白试剂出口[N];泰州日报;2010年
4 金陵;融合蛋白试剂首次出口美国[N];中国医药报;2010年
5 吴红梅;我省首批融合蛋白试剂出口美国[N];新华日报;2010年
6 石家庄市行唐县兽医防疫站 王金合 韩志英;猪链球菌和附红细胞体混合感染的诊治[N];河北农民报;2010年
7 记者 张晔 通讯员 刘宁春;一种有效治疗冠心病的融合蛋白发现[N];科技日报;2009年
8 通讯员 沈季 记者 张兆军;抗肿瘤融合蛋白进入临床试验[N];科技日报;2005年
9 记者 魏巍 通讯员 沈季;吉大一抗肿瘤新药进入临床试验阶段[N];长春日报;2005年
10 冯卫东;抑制蛋白相互作用可成为治癌新方法[N];科技日报;2009年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978