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表达新城疫病毒F_(48)E_8株融合蛋白基因的重组鸡痘病毒的构建及其免疫效力检测

徐志伟  
【摘要】: 新城疫(ND)是对养禽业危害最大的病毒性传染病之一,而新城疫病毒(NDV)F_(48)E_8株则是中国的标准强毒。为了研制有效的ND基因工程疫苗,本实验构建了表达NDV F_(48)E_8株融合蛋白(F蛋白)基因的重组鸡痘病毒(rFPV),并测定了rFPV的免疫效力,为NDV基因工程苗今后的开发提供了试验基础。现将本实验所做的工作从两个方面概述如下: 1.从含有NDV F_(48)E_8 F基因的质粒PE1/E2-3,运用PCR法扩增的F基因,并将基因定向克隆到转移载体pEFgpt12S的Ecogpt基因下游,构建成转移载体pEF-2。以磷酸钙转染的方法转染含有F基因的重组鸡痘病毒rFPVNDF感染的鸡胚成纤维细胞,经有限稀释法挑取病毒蚀斑,;利用MXHAT培养基而进行负性筛选,得到了稳定生长新的重组鸡痘病毒rFPV-2。该重组毒具有两个F基因。间接免疫荧光试验表明,rFPV-2感染的鸡胚成纤维细胞中表达了NDV的F基因,与rFPVNDF相比,荧光数目更多,表明F蛋白的表达量更大。 2.评价了重组毒rFPV-2、rFPVNDF的免疫效力。在用SPF鸡进行的一次免疫效力试验中,9日龄的试验鸡接种rFPV-2和rFPVNDF后,能产生对大剂量NDV强毒的保护,保护率分别为50%和43%。将rFPV-2和Lasota结合使用保护率和疫苗对照组Lasota相同。从接种rFPV-2和rFPVNDF的试验鸡中检测出了中和抗体。在用用SPF鸡进行的二次免疫效力试验中rFPV-2和rFPVNDF产生的保护率为79%和64%,而rFPV-2和Lasota结合使用保护率超过了对照组Lasota,达到了100%。


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