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半胱胺对断奶前后仔猪胃粘膜H~+-K~+-ATPase 表达和活性的影响及其作用机制初探

石志敏  
【摘要】:本研究旨在探讨半胱胺对断奶前后仔猪胃粘膜H`+-K~+-ATPase表达和活性的影响及其可能的作用机制。在日粮中添加半胱胺饲喂仔猪,采用相对定量RT-PCR方法测定断奶前后仔猪胃粘膜H~+-K~+-ATPase的表达,同时测定其活性,以在整体水平观察半胱胺对仔猪胃粘膜H~+-K~+-ATPase表达和活性的影响。在此基础上,用半胱胺处理培养的仔猪胃粘膜上皮细胞和壁细胞,测定SS的表达以及H~+-K~+-ATPase的表达和活性,以探讨半胱胺可能的作用机制。 1.半胱胺对断奶前后仔猪胃粘膜H~+-K.+-ATPase表达和活性的影响 选取新生仔猪18窝,随机分为实验组和对照组各9窝,自12日龄起,对照组饲喂基础乳猪料,实验组在基础饲料中添加半胱胺120mg/kg饲料,仔猪均于35日龄断奶。分别于断奶前1周、断奶当天、断奶后36h、72h、1周以及断奶后10d屠宰仔猪取胃底粘膜,每个时间点随机选取实验组和对照组仔猪各6头,用相对定量RT-PCR方法测定不同日龄仔猪胃粘膜中H~+-K~+-ATPase mRNA表达的相对含量,并同时测定H~+-K~+-ATPase的活性。结果表明:(1)对照组和实验组仔猪在断奶前1周至断奶后10天,H`+-K~+-ATPase mRNA相对含量和H~+-K~+-ATPase活性在断奶后10天均达到最高水平,但总体不表现显著的年龄差异;(2)半胱胺能明显提高仔猪胃粘膜中H~+-K~+-ATPase mRNA的表达,在断奶前1周、断奶当天、断奶后1周和断奶后10天均出现显著差异(P0.05)。半胱胺也能明显提高H~+-K~+-ATPase的活性,在断奶当天和断奶后10天H~+-K~+-ATPase的活性分别被提高32.3%和18.3%(P0.05);(3)观察期内对照组和实验组H~+-K~+-ATPase mRNA水平和H~+-K~+-ATPase活性之间未发现显著的相关性。以上结果说明断奶前后仔猪H~+-K~+-ATPase的mRNA相对含量和活性没有明显的日龄差异,断奶对H~+-K~+-ATPase mRNA表达和活性没有影响,而半胱胺可显著增强H~+-K~+-ATPase的表达和活性。 2.半胱胺的作用机制初探 仔猪胃粘膜上皮细胞被分为四组,在含10%胎牛血清的DMEM高糖培养液中培养24h后,分别在新鲜的基础培养液中添加0(对照组)、0.001(低浓度组)、0.01(中


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