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我国部分地区猪流感病毒分子流行病学及致病性研究

祁贤  
【摘要】:1 套式RT-PCR方法检测临床样品中的猪流感病毒 根据A型流感病毒NP基因的保守序列设计两对引物,建立了检测临床样品中猪流感病毒的套式RT-PCR方法。该法对其它猪呼吸道病原体如PRRSV、PCV-2型和猪支原体无交叉反应。用琼脂糖凝胶电泳检测,套式RT-PCR比常规RT-PCR敏感至少100倍。用建立的套式RT-PCR方法检测35份来自华南地区猪的临床样品,其中4份血样,31份肺样。结果阳性28份,阳性率为80%(28/35)。28份阳性样品接种9-10日龄SPF鸡胚,分离出23株病毒,套式RT-PCR与鸡胚病毒分离方法的符合率为82%(23/28),但比后者敏感18%。用SPF鸡胚从套式RT-PCR检测阴性的7份样品中未分离到病毒。建立的套式RT-PCR方法具有快速、特异、敏感的特点,尤其对临床症状不明显的流感病毒隐性感染的检出更具优势。该方法适用于大量临床样品的初步筛选,有助于猪群流感的病毒监测。 2 我国部分地区SIV的分离和亚型鉴定 2003年12月到2005年10月期间,从全国部分地区的60个猪场中采集到106份样品,包括66份肺样、36份鼻拭子和4份血清。这些猪场都不同程度的发生了呼吸系统疾病。样品采集的地区包括广东、广西、安徽、江苏、浙江、上海、山东和河北等省市。通过套式RT-PCR方法共检出流感病毒NP核酸阳性的样品67份,分布在32个猪场中,检出率为63%。核酸检测阳性的样品接种9-11日龄的SPF鸡胚,共分离到57猪流感病毒,分离率为85%。采用H1和H3亚型鉴定RT-PCR法与血凝抑制试验对其中的36株病毒进行分型研究,其中21株为H3亚型,6株为H1亚型,9株为H9亚型。表明近年来我国猪群的SIV流行情况较为复杂,呈现多种亚型共存的局面,至少包括H3、H1和H9三种亚型,其中H3是优势流行亚型。 3 3株基因重配的H1N2亚型猪流感病毒的分离鉴定及遗传特性分析 2004年11月从浙江省爆发呼吸道疾病的某猪场中收集到三份肺脏样品,通过接种SPF鸡胚,分离到3株病毒,经鉴定都为H1N2亚型流感病毒。其中的一株命名为A/Swine/Zhejiang/1/2004,简称Sw/ZJ/1/2004,为了揭示其遗传起源和分子特性,


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